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小鼠ELISA試劑盒操作中必須注意2018/06/04
小鼠ELISA試劑盒操作中必須注意1、加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。2、作時(shí)必須戴手套,穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。3、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。4、同批號(hào)試劑組分不得混用。5、洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。6、每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及
豬ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中當(dāng)中應(yīng)注意兩個(gè)問(wèn)題2018/06/01
豬ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中當(dāng)中應(yīng)注意兩個(gè)問(wèn)題1.當(dāng)抗原材猜中的干擾物質(zhì)不易除掉,或不易得到滿足的純化抗原時(shí),可用此法檢測(cè)特異性抗體.其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)賽與固相抗原結(jié)合.2.標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因而陽(yáng)性反響呈色淺于陰性反響.如抗原為高純度的,可直接包被固相.如抗原中會(huì)有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可選用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后參加抗原,構(gòu)成固相抗原.3.洗刷除掉抗原中的雜質(zhì),elisa試劑盒然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競(jìng)賽結(jié)合反響.
其它類ELISA試劑盒使用時(shí)出現(xiàn)白板異常的原因:2018/05/30
其它類ELISA試劑盒使用時(shí)出現(xiàn)白板異常的原因:1、試劑盒已過(guò)效期,或不同試劑盒組分混用。處理辦法:檢查試劑盒的組分及批號(hào),確認(rèn)未過(guò)期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒,不同試劑盒或不同批號(hào)的不能混用。2、錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑A或B。處理辦法:嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現(xiàn)象。3、洗板及加樣過(guò)程中,酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力。處理辦法:確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈。4、終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液
ELISA試劑盒檢測(cè)試劑盒操作過(guò)程2018/05/28
ELISA試劑盒檢測(cè)試劑盒操作過(guò)程1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取滿足數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,別離設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記載各孔方位,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中參與標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先參與待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗
大鼠ELISA試劑盒操作時(shí)樣本的制備方法2018/05/25
大鼠ELISA試劑盒操作時(shí)樣本的制備方法:A、高值樣本:a)至少選用三個(gè)高濃度樣本,稀釋倍數(shù)應(yīng)為方法性能標(biāo)明的zui大稀釋倍數(shù)、并適當(dāng)增加或減小稀釋比例。b)選取含被測(cè)物的高值樣本,必要時(shí)可添加被分析物的純品,并計(jì)算出理論值。c)使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液,或測(cè)定方法要求的稀釋液對(duì)高值待測(cè)樣本進(jìn)行稀釋,使其接近于線性范圍的上1/3區(qū)域內(nèi),并記錄稀釋倍數(shù)。B、低值樣本:將待測(cè)樣本用混合人血清(含被分析物濃度水平較低),或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液進(jìn)行稀釋,產(chǎn)生接近于方法線性范圍低
小鼠ELISA試劑盒加樣須注意如下問(wèn)題2018/05/23
小鼠ELISA試劑盒加樣須注意如下問(wèn)題:1.吸取樣品時(shí),加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體;加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體,這樣會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上,加樣不準(zhǔn)確!2.不要將吸頭伸入孔中,一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭,另一方面可能會(huì)將孔中的液體吹起來(lái),加樣不準(zhǔn)確!正確的加樣方法應(yīng)為45度,吸頭貼著孔壁加入,應(yīng)注意:1.角度太小,會(huì)使液體殘留在孔壁上,導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確!2.吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處。實(shí)驗(yàn)結(jié)果辦法:1)請(qǐng)配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液A和B,以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差。2)酶標(biāo)板在溫育時(shí)
豬ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)內(nèi)標(biāo)法的操作2018/05/21
豬ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)內(nèi)標(biāo)法的操作①將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品,制成混合標(biāo)樣,并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣?;旌蠘?biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。②注入色譜柱,以(標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積)為響應(yīng)值。③根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系,即W=f×A,制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。④將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品,注入色譜柱,得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。⑤根據(jù)已知的系數(shù)f,即可求出欲測(cè)組分的濃度。技術(shù)中要注意的問(wèn)題:1、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。2、底物請(qǐng)避光保存。3、嚴(yán)格按照技術(shù)說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)
其它類ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)五大技巧2018/05/16
其它類ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)五大技巧一:操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。二:正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。三:手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)
ELISA試劑盒技術(shù)中要注意的問(wèn)題2018/05/14
ELISA試劑盒技術(shù)中要注意的問(wèn)題:1、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。2、底物請(qǐng)避光保存。3、嚴(yán)格按照技術(shù)說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。4、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。5、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。6、如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。檢驗(yàn)中可用于測(cè)定:1)體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。2)激素,包括小分子量的甾體激素等。3)抗生素和藥物。4)病原體抗原,HBsAg、HBeAg等。5)另外,也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中
大鼠ELISA試劑盒操作流程及注意事項(xiàng)2018/05/11
大鼠ELISA試劑盒操作流程及注意事項(xiàng)1.1該儀器必須有專人保管,使用前需通讀儀器說(shuō)明書(shū)。1.2嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,如儀器出現(xiàn)故障,應(yīng)馬上停止使用,并立即向保管人、儀器管理人以及科室負(fù)責(zé)人報(bào)告,嚴(yán)格按照單位有關(guān)制度實(shí)施,不得擅自“修理”,查明原因,處理后儀器保管人應(yīng)及時(shí)做好故障情況及維修記錄。2.洗板機(jī)的設(shè)備運(yùn)行步驟2.1擰開(kāi)廢液瓶口的蓋子,倒掉廢液瓶的廢液,加入適量漂白確的方位。確保微孔板未被遮蓋。保證待洗反應(yīng)板所有的孔處于同一水平位置,以免孔邊緣過(guò)高碰到洗板機(jī)的吸液針。粉,再把蓋子擰緊。注意不
小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的基本操作程序2018/05/09
小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的基本操作程序1、其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)分是只需用胰酶潤(rùn)洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無(wú)法核算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min滿足消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,接連這樣傳代,對(duì)細(xì)胞損傷很大。簡(jiǎn)略的程序是PBS潤(rùn)洗吸去,胰酶潤(rùn)洗吸去,然后37度消化。2、什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞悉數(shù)成距離散布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼調(diào)查貼壁細(xì)胞層,只需能移動(dòng)了,八成呈沙壯移動(dòng),其實(shí)現(xiàn)已能夠了,許多人喜愛(ài)
豬ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中需要注意的這些檢測(cè)要點(diǎn)2018/05/07
豬ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中需要注意的這些檢測(cè)要點(diǎn);1)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)確定試劑盒在有效期內(nèi),按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全,以及所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等。2)標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份,短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者,注意低溫保存。3)按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑,選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì);若選擇兩個(gè)單抗,必須識(shí)別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體。4)一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品
其它類ELISA試劑盒常見(jiàn)樣本采集方法2018/05/04
其它類ELISA試劑盒常見(jiàn)樣本采集方法:血清:全血在室溫自然凝固30分鐘后,1000g離心30分鐘,小心收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。血漿:根據(jù)試劑盒要求選擇合適的抗凝劑,與全血混合20分鐘后,1000g離心30分鐘,小心收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。細(xì)胞培養(yǎng)上清:將細(xì)胞培養(yǎng)液300g離心10分鐘去除沉淀物,,仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。所有標(biāo)本收集完成后,應(yīng)及時(shí)分裝放在-20℃或-70℃條件下保存,避免反復(fù)凍融。如果在24小時(shí)內(nèi)檢測(cè),樣本可
ELISA試劑盒常見(jiàn)樣本采集方法2018/05/02
ELISA試劑盒常見(jiàn)樣本采集方法:血清:全血在室溫自然凝固30分鐘后,1000g離心30分鐘,小心收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。血漿:根據(jù)試劑盒要求選擇合適的抗凝劑,與全血混合20分鐘后,1000g離心30分鐘,小心收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。細(xì)胞培養(yǎng)上清:將細(xì)胞培養(yǎng)液300g離心10分鐘去除沉淀物,,仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。所有標(biāo)本收集完成后,應(yīng)及時(shí)分裝放在-20℃或-70℃條件下保存,避免反復(fù)凍融。如果在24小時(shí)內(nèi)檢測(cè),樣本可以存放
ELISA試劑盒操作步驟進(jìn)行測(cè)定2018/04/25
ELISA試劑盒操作步驟進(jìn)行測(cè)定因此有些為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被,該類試劑盒的流行病學(xué)敏感度不夠,穩(wěn)定性也成問(wèn)題。也有堅(jiān)持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度,科學(xué)地對(duì)待反應(yīng)結(jié)果。ELISA試劑盒基因工程抗原是抗原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為表達(dá)系統(tǒng)。該類抗原與合成肽相比具有以下特點(diǎn):分子量大。合成肽采用化學(xué)方法制備,由于工藝的局限,合成數(shù)量有限,只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。良好的ELISA試劑盒板應(yīng)該是吸附
ELISA試劑盒間接法簡(jiǎn)單操作步驟2018/04/18
ELISA試劑盒間接法簡(jiǎn)單操作步驟:(1)、將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原;(2)、加稀釋的受檢血清,保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗-體復(fù)合物;(3)、加酶標(biāo)抗抗體;(4)、加入酶促反應(yīng)底物,發(fā)生顯色反應(yīng),顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。特點(diǎn):1、采用全進(jìn)口原料和抗體----、靈敏、特異,嚴(yán)格引進(jìn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行批量2、規(guī)范包被操作----吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高3、先進(jìn)的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,可靠性強(qiáng)4、購(gòu)買本公司的ELISA試劑盒,提供免
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