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2016
01-06

Northern雜交的檢測
(一)原理Northern雜交(Northernblotting)是利用DNA可以與RNA進(jìn)行分子雜交來檢測特異性RNA的技術(shù)，首先將RNA混合物按它們的大小和分子量通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，分離出來的RNA轉(zhuǎn)至尼龍膜或硝酸纖維素膜上，再與放射性標(biāo)記的探針雜交，通過雜交結(jié)果可以對表達(dá)量進(jìn)行定性或定量。Northern雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計(jì)其豐度的實(shí)驗(yàn)方法，可以從大量的RNA樣本同時(shí)獲得這些信息。其基本步驟包括：①完整mRNA的分離；②根據(jù)RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RN
2016
01-04

白介素一2
(一)3H—TdR摻入法1．原理白介素一2(interleukin一2，IL-2)主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，又為T細(xì)胞增殖所必需，故稱T細(xì)胞生長因子(Tcellgrowthfactor，TCGF)。IL一2產(chǎn)生的水平反映Tll胞的功能，不僅是免疫調(diào)節(jié)重要的研究對象，而且與臨床多種疾病密切相關(guān)。IL一2依賴細(xì)胞株是C578L／6來源的小鼠殺傷性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicT—lymphocyteline，CTL)細(xì)胞系，由Gills，1977年建立，只有在IL-2存在的培養(yǎng)基中才能生長。因此可作為指
2015
12-31

染色體標(biāo)本制備
細(xì)胞遺傳學(xué)毒性檢測主要是在分子水平檢測毒性物質(zhì)對細(xì)胞遺傳性的影響；在遺傳性疾病的分子診斷和致病機(jī)制研究中，已得到廣泛應(yīng)用。常用的檢測技術(shù)包括染色體畸變分析、微核試驗(yàn)、基因突變和DNA斷裂檢測等。*節(jié)染色體標(biāo)本制備染色體是在顯微鏡下可見的細(xì)胞有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。對染色體檢查分析之前，需要進(jìn)行染色體標(biāo)本制備。通常情況下，都是利用外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析。正常情況下．人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂，但植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)可刺激血中的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)
2015
12-28

無菌操作室的注意事項(xiàng)
1)無菌操作室的注意事項(xiàng)①嚴(yán)格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。②無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級，室內(nèi)溫度保持在20—24℃，濕度保持在45％～60％。超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級。ELISA試劑盒③無菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染的停止使用。④無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。⑤需要帶人無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅
2015
12-25

無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)
所有上述的有關(guān)血清培養(yǎng)基的問題都可通過不使用血清和動(dòng)物源性產(chǎn)物而得到控制，另外，無血清培養(yǎng)基還有以下兩個(gè)主要的優(yōu)點(diǎn)：(1)具有選擇性能選擇性地促進(jìn)特殊類型細(xì)胞的生長是無血清培養(yǎng)基的主要優(yōu)點(diǎn)之一。例如，用MCDBl70和153培養(yǎng)基培養(yǎng)乳腺細(xì)胞和皮膚細(xì)胞可有效地抑制成纖維細(xì)胞的過度生長；黑素細(xì)胞能在沒有成纖維細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞的條件下培養(yǎng)；在造血細(xì)胞培養(yǎng)中，通過挑選某種適當(dāng)?shù)纳L因子或一組生長因子，可選擇性地使單一細(xì)胞譜系甚至某個(gè)分化階段的細(xì)胞生長?，F(xiàn)在許多這類選擇性培養(yǎng)基已有商業(yè)產(chǎn)品以適應(yīng)培養(yǎng)各種類
2015
12-23

細(xì)胞活性檢查的原理與方法
1)訓(xùn)練目的了解細(xì)胞活性檢查的原理；掌握染料的配制方法；掌握細(xì)胞活性檢查方法。2)實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，某些染料可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止這類染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。常用的染料有臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑、結(jié)晶紫。3)實(shí)驗(yàn)材料①臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑、結(jié)晶紫溶液(溶于Hank's液或BSS液)。②冷凍復(fù)蘇后的細(xì)胞或其他培養(yǎng)細(xì)胞。③研缽、濾紙、漏斗、試劑瓶、標(biāo)簽紙、顯微鏡、膠頭滴管、鑷子、載玻片、蓋玻片、計(jì)數(shù)器。4)操作步驟(1)配制染色液①0.5％臺(tái)盼藍(lán)
2015
12-21

細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽（（GSH）的測定
(一)原理細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽((GSH)可保護(hù)細(xì)胞免受損傷，藥物或毒物可通過使細(xì)胞內(nèi)GSH耗竭而導(dǎo)致細(xì)胞受損。(二)材料1.96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的待測細(xì)胞與對照組細(xì)胞。2．O．1mol／LPBS(pH8．0)0．1mol／LNa2HPO4溶液170ml和O．1mol／LNaH2PO4溶液34ml混勻。3．DTNB溶液用0．1mol／LPBS配成6．5％TCA溶液。(三)方法培養(yǎng)細(xì)胞的96孔培養(yǎng)板，傾去培養(yǎng)液，加入O．1mol／LPBS洗滌各孔，倒掉PRS，加入6．5％TCA0．05ml，4℃放置3
2015
12-18

大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α （SDF-1α）分析試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（SDF-1α）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（SDF-1α）水平。用純化的大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（SDF-1α）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（SDF-1α），再與HRP標(biāo)記的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（SDF-1α）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶
2015
12-14

小鼠小腸結(jié)腸炎耶爾森菌試劑盒
耶爾森菌實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中小鼠小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（Yersiniaenterocolitica）。用純化的小鼠小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（Yersiniaenterocolitica）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（Yersiniaenterocolitica）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（Yersiniaenterocolitica）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過
2015
12-11

*0感受態(tài)細(xì)胞操作步驟
產(chǎn)品簡介本產(chǎn)品是大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。*0是一種常用于質(zhì)?？寺〉木?，其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途注意事項(xiàng)1．感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃下保存，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。2．轉(zhuǎn)化所有步
2015
12-09

ELISA競爭法操作步驟
競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量成反比。操作步驟如下：1、將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。2、待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合，競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原，保溫后，酶標(biāo)抗
2015
12-07

ELISA試劑盒首要考慮的條件
在ELISA試劑盒測定時(shí)，受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。拋開品牌、價(jià)格來說。選擇ELISA試劑盒首要考慮這幾個(gè)條件：1、編號(hào)：將樣品對應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2、加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50?l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40?l，然后再加待測樣
2015
12-04

ChIP的一般操作流程（第二天）
ChIP的一般流程：甲醛處理細(xì)胞---收集細(xì)胞，超聲破碎---加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合---加入ProteinA，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，并沉淀---對沉淀下來的復(fù)合物進(jìn)行清洗，除去一些非特異性結(jié)合---洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物---解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷---PCR分析。在PCR分析這一塊，比較傳統(tǒng)的做法是半定量-PCR。但是現(xiàn)在隨著熒光定量PCR的普及，大家也越來越傾向于Q-PCR了。此外還有一些由ChIP衍生出來的方法。例如RIP（其實(shí)
2015
12-02

制備SDS-PAGE 凝膠
制備SDS-PAGE凝膠(1)將灌膠玻璃板洗凈，晾干固定，確定灌制分離膠液面標(biāo)志線（距樣品梳子底部約0.5-1.0cm處）。ELISA試劑盒(2)配制10%分離膠8ml，快速灌入凝膠玻璃槽中，使其液面至標(biāo)志線位置（避免產(chǎn)生氣泡）。(3)立即用去離子水覆蓋膠面（隔絕空氣，有助于凝膠聚合），室溫放置約40min至分離膠凝固。(4)配制5%濃縮膠4ml。(5)倒掉去離子水覆蓋液，并用吸水紙吸掉殘留的液體。將凝膠板重新垂直放置，輕輕加入5%濃縮膠液（注意避免產(chǎn)生氣泡），插入樣品梳，室溫凝膠約40分鐘。(
2015
11-30

誘變育種的作用和特點(diǎn)
誘變育種微生物誘變育種是用人工誘變方法誘發(fā)微生物基因突變，通過隨機(jī)篩選，從多種多樣的突變體中篩選出產(chǎn)量高、性能優(yōu)良的突變體，并找出突變體的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，使突變體在zui適環(huán)境條件下大量合成目的產(chǎn)物。因此，誘變、篩選和改變環(huán)境因素是誘育種的三個(gè)重要環(huán)節(jié)，三者相輔相成，缺一不可。ELISA試劑盒1.誘變育種的作用和特點(diǎn)1．1誘變育種的作用誘變育種的作用主要有以下幾方面。(1)提高有效產(chǎn)物的產(chǎn)量通過誘變育種可以提高代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。目前在大多數(shù)發(fā)中所使用的菌種都是通過誘變育種獲得的突變株。對新分離的
2015
11-27

慶大霉素功能主治及注意事項(xiàng)
慶大霉素（Gentamicin）是一種氨基糖苷類抗生素，主要用于治療細(xì)菌感染，尤其是革蘭氏陰性菌引起的感染。慶大霉素能與細(xì)菌核糖體30s亞基結(jié)合，阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。慶大霉素是為數(shù)不多的熱穩(wěn)定性的抗生素，因而廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)基配置。ELISA試劑盒【主要成分】本品主要成份為硫酸慶大霉素，為一種多組分抗生素，含C1、C1a、C2a、C2等組分；輔料為：無水亞硫酸鈉，注射用水?！竟δ苤髦巍?.用于治療敏感革蘭陰性桿菌如大腸埃希菌克雷伯菌屬腸桿菌屬變形桿菌屬沙雷菌屬銅綠假單胞菌以及葡萄球菌甲氧西林敏感株
2015
11-25

ELISA常見10個(gè)問題
1.產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格？可檢測多少個(gè)樣本？產(chǎn)品分為48T和96T兩種規(guī)格。ELISA試劑盒每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個(gè)不同濃度，加上空白孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個(gè)孔。因此，一個(gè)48T試劑盒zui多可以測定40個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完），一個(gè)96T試劑盒zui多可以測定88個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完）。可以根據(jù)實(shí)際樣本數(shù)量和實(shí)驗(yàn)計(jì)劃選擇合適的產(chǎn)品規(guī)格。2.48T和96T的試劑盒有哪些不同？48T和96T的試劑盒，每個(gè)孔的反應(yīng)體系都是*一樣的。不同的是試劑盒中各組分的規(guī)格，詳見說明書。3.產(chǎn)品的穩(wěn)定性
2015
11-23

了解細(xì)胞的毒性作用
檢查待測物對細(xì)胞的毒性試驗(yàn)有體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)之分。體外試驗(yàn)是檢查待測物對培養(yǎng)細(xì)胞的影響，方法是將一定量待測物作用于體外培養(yǎng)細(xì)胞，再通過觀察或測定細(xì)胞增殖、存活率、形態(tài)改變、DNA合成及遺傳性狀等變化對細(xì)胞的毒性作用。(一)化學(xué)物質(zhì)的一般毒性檢測要了解化學(xué)物質(zhì)對培養(yǎng)細(xì)胞一般生物學(xué)性狀的毒性作用，首先將不同稀釋度的待測化學(xué)物質(zhì)加至一定數(shù)量的培養(yǎng)細(xì)胞中，培養(yǎng)一定時(shí)間后，觀察細(xì)胞形態(tài)、存活率、增殖情況及DNA合成情況。該方法簡單易行。例如測定DNA抑制劑或RNA抑制劑的作用時(shí)?？刹捎迷摲椒?。(二)培養(yǎng)細(xì)胞
2015
11-20

免疫吸附劑包被的方式
免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個(gè)月。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體，檢測人員需自行包被。包被的方式將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白
2015
11-18

骨髓細(xì)胞的培養(yǎng)
骨髓作為主要的造血場所，可進(jìn)行體外培養(yǎng)。在無菌條件下，把骨髓細(xì)胞分離出來，置于培養(yǎng)系統(tǒng)中，在合適的環(huán)境中，提供營養(yǎng)物質(zhì)，使其繼續(xù)生存或生長。通過培養(yǎng)骨髓，可見到造血干細(xì)胞不同分化階段時(shí)各種血細(xì)胞的前驅(qū)細(xì)胞。用通常的形態(tài)學(xué)方法不可能識(shí)別造血干細(xì)胞和各種血細(xì)胞的前驅(qū)細(xì)胞，但在加入各種造血因子的半固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)后，可出現(xiàn)單個(gè)前驅(qū)血細(xì)胞的增殖、分化，并形成細(xì)胞克隆。一、材料1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠(C57BL／6\B6D2Fl等)2只。2．培養(yǎng)液瓊脂(Difco)、a—MEM、FBS(用新生牛血清、人血清也

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