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一抗的選擇2010/07/29: 一抗的選擇檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型l樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)l樣本的種屬l抗體宿主的種類l抗體的標(biāo)記和檢測(cè)l1.分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WBIHCICCELASA分析等，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某

miRNA的特征、功能及識(shí)別方法等詳解2010/07/29: miRNA的特征、功能及識(shí)別方法等詳解什么是miRNAMicroRNAs（miRNAs）是一種大小約21—23個(gè)堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（雙鏈）但是和siRNA密切相關(guān)。據(jù)推測(cè)，這些非編碼小分子RNA（miRNAs）參與調(diào)控基因表達(dá)，但其機(jī)制區(qū)別于siRNA介導(dǎo)的mRNA降解。*個(gè)被確認(rèn)的miRNA是在線蟲中發(fā)現(xiàn)的lin-4和let-7，隨后多個(gè)研究小組在包括人類、果蠅、植物等多種生物物種中鑒別出

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)：破碎技術(shù) 2010/07/26: 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)：破碎技術(shù)除了某些細(xì)胞外的多肽激素和某些蛋白質(zhì)與酶以外，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)或多細(xì)胞生物組織中的各種生物大分子的分離純化，都需要事先將細(xì)胞和組織破碎，使生物大分子充分釋放到溶液中，并不丟失生物活性。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細(xì)胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動(dòng)物臟器的細(xì)胞膜較脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有較堅(jiān)固的纖維素、半纖維素組成的細(xì)胞壁，要采取專門的細(xì)胞破碎方法。1.機(jī)械破碎（1）研磨研磨是將剪碎的動(dòng)物組織置于研缽或勻漿器中，加入少量石英砂研磨或勻漿

大鼠TNF-B酶聯(lián)免疫分析ELISA 2010/07/23: 大鼠TNF-B酶聯(lián)免疫分析ELISA預(yù)期應(yīng)用ELISA法定量測(cè)定大鼠血清、血漿或其它相關(guān)液體中TNF-B含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中TNF-B水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入TNF-B、生物素化的抗TNF-B抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TNF-B呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算

酶的提取，分離純化和生產(chǎn)方法2010/07/22: 酶的提取，分離純化和生產(chǎn)方法酶的提取，分離純化（一）細(xì)胞破碎處理許多酶都存在于細(xì)胞內(nèi)。為了提取這些胞內(nèi)酶，首先需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎處理。細(xì)胞破碎的方法很多，主要包括機(jī)械破碎法、物理破碎法、化學(xué)破碎法和酶學(xué)破碎法等。機(jī)械破碎法是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器等將細(xì)胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎?；瘜W(xué)破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變。酶學(xué)破碎法是指選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎。

細(xì)菌數(shù)量的測(cè)定方法2010/07/21: 細(xì)菌數(shù)量的測(cè)定方法1、計(jì)數(shù)器測(cè)定法即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的（0.1mm3），因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡(jiǎn)便易行，可立即得出結(jié)果。本法不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)。2、電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測(cè)定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。該法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它

白細(xì)胞介素-2（IL-2）生物學(xué)活性測(cè)定2010/07/21: 白細(xì)胞介素-2（IL-2）生物學(xué)活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握IL-2生物學(xué)活性測(cè)定的原理。2.熟悉IL-2生物學(xué)活性測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果計(jì)算。實(shí)驗(yàn)原理IL-2是由Th細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子，在淋巴細(xì)胞增殖分化過程中起到非常重要的作用。IL-2活性測(cè)定基于IL-2能維持IL-2依賴細(xì)胞的代謝和存活，促進(jìn)這類細(xì)胞的增殖。細(xì)胞在增殖時(shí)能量代謝活躍，可產(chǎn)生大量的能量以供合成多種大分子物質(zhì)和細(xì)胞分裂所需，能量代謝的水平與細(xì)胞合成DNA水平基本平行，因此，測(cè)定細(xì)胞能量代謝的水平可以間接地反映細(xì)胞增殖情況。MTT（四

地高辛配基隨機(jī)標(biāo)記DNA探針2010/07/21: 地高辛配基隨機(jī)標(biāo)記DNA探針1．標(biāo)記DNA探針每次標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)可標(biāo)記10ng至3?線性的DNA，也可標(biāo)記更大量的DNA，但所有的成分和體積要相應(yīng)增加。（1）DNA探針熱變性，煮沸10min，迅速冷卻于冰/乙醇中5min以上，待用。（2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及試劑：新鮮變性的DNA1-3?六聚核苷酸混合物2?（管5）dNTP標(biāo)記用混合底物2?（管6）加無菌重蒸水至19?DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow）1?（管7）（3）在37℃保溫至少60min，可到20h。（4）

胰蛋白酶的制備及活力的測(cè)定2010/07/20: 胰蛋白酶的制備及活力的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理胰蛋白酶是以無活性的酶原形式存在于動(dòng)物胰臟中，在Ca2+的存在下，被腸激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活，從肽鏈N端賴氨酸和異亮氨酸殘基之間的肽鍵斷開，失去一段六肽，分子構(gòu)象發(fā)生一定改變后轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘囊鹊鞍酌?。胰蛋白酶原的分子量約為24000，其等電點(diǎn)約為pH8.9，胰蛋白酶的分子量與其酶原接近（23300），其等電點(diǎn)約為pH10.8，zui適pH7.6～8.0，在pH=3時(shí)zui穩(wěn)定，低于此pH時(shí)，胰蛋白酶易變性，在pH5時(shí)易自溶。Ca2+離子對(duì)胰蛋白酶有穩(wěn)定作

流式細(xì)胞儀血小板分析 2010/07/19: 流式細(xì)胞儀血小板分析流式細(xì)胞儀血小板分析應(yīng)用范圍通過分析信號(hào)傳遞、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、顆粒釋放、糖蛋白構(gòu)形、膜磷脂、與抗凝因子的結(jié)合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對(duì)刺激物的反應(yīng)性通過分析受激后表面結(jié)合蛋白觸發(fā)凝血鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和表面糖蛋白缺陷檢測(cè)，分析血小板止血功能的獲得性和遺傳性缺陷結(jié)合血小板大小，檢測(cè)血小板RNA含量，分析血小板成熟度，計(jì)數(shù)網(wǎng)織血小板發(fā)現(xiàn)血小板抗體，做定性和定量分析血小板分析的臨床應(yīng)用血小板活化導(dǎo)致的血栓前綜合癥：如糖尿病、非免疫性血小板活化血管缺陷導(dǎo)致的血小板活化：如動(dòng)脈粥樣硬化、

免疫組化操作應(yīng)用規(guī)程2010/07/16: 免疫組化操作規(guī)程（一）、儀器設(shè)備1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐；2）水浴鍋（二）、試劑1）PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L。2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉3g，檸檬酸0.4g。3）0.5mol/LEDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10mmol/LNaOH調(diào)至pH8.

細(xì)胞冷凍和復(fù)蘇 2010/07/16: 細(xì)胞冷凍和復(fù)蘇基本原理：在長(zhǎng)期的細(xì)胞培養(yǎng)過程中可能會(huì)出現(xiàn)微生物污染或基因型改變等情況，會(huì)導(dǎo)致具有優(yōu)良特性細(xì)胞系的丟失。為防止這些細(xì)胞的丟失，細(xì)胞可以經(jīng)快速冷凍并幾乎無限期保存在非常低的溫度下，如液氮（-176℃）。試劑和設(shè)備：冷凍液:90%滅活血清+10%DMSO（或甘油），用0.45μm微孔濾膜過濾除菌，4℃保存；培養(yǎng)液；臺(tái)盼藍(lán)溶液（0.4%溶解于PBS）；70%乙醇；組織培養(yǎng)瓶；15-50ml無菌圓錐底離心試管；離心機(jī)；血球計(jì)數(shù)板；超凈工作臺(tái)；光學(xué)顯微鏡；37℃水?。焕鋬龉?；-80℃冰箱；液

血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2010/07/16: 血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對(duì)象，二是取材過程。用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無病并且在的出生天數(shù)之內(nèi)，取材過程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，制備出的血清要經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。2.有些國(guó)家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。3.證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。4.血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。5.無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒

蛋白酶保存2010/07/15: 蛋白酶保存問：我要提取一種蛋白水解酶，打算保存在－80度。用時(shí)取出凍融，這樣對(duì)酶活性有影響么？這種低溫保存的酶怎樣放置使用時(shí)活性的喪失呢？答：-80應(yīng)該可以，再有幾個(gè)建議：盡量以高濃度保存，使用時(shí)再稀釋成工作濃度；分裝成小管，每次只用一小管別全凍融；加一定量的甘油（10-50%）有助于保護(hù)酶的活性。

抗體與免疫球蛋白有什么不同？2010/07/15: 抗體與免疫球蛋白有什么不同？生物科技發(fā)展在中國(guó)整個(gè)科技史都處于落后狀態(tài)，近年來，國(guó)家科技迅猛發(fā)展，取的了可喜的成績(jī)，過去有很長(zhǎng)一段時(shí)間有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統(tǒng)稱為兩種（γ）球蛋白。后來發(fā)現(xiàn)，抗體并不都在γ區(qū)；并且位于γ區(qū)的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。1964年，世界衛(wèi)生組織舉行專門會(huì)議，將具有抗體活性以及與抗體相關(guān)的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白（Ig），如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因

invitrogen產(chǎn)品現(xiàn)貨2010/06/21: 上海嶸崴達(dá)專業(yè)經(jīng)營(yíng)進(jìn)品實(shí)驗(yàn)室試劑，耗材，以下為invitrogen產(chǎn)品現(xiàn)貨M32701GoatAnti-MouseIgG3（gamma）HumanAds.FITC200-800T0.5mL￥1,010M2AFPMouseIgG2aFITC+MouseIgG2aR-PE2color50T0.5mL￥1,310R302rhodamine12325mg￥1,310MH1041MouseAnti-HumanIgG4FcPurified[MouseIgG1K:HP6025]0.5mL0.25mg￥1,56

PeproTech細(xì)胞因子使用2010/04/02: PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白（CarrierProtein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來進(jìn)行凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會(huì)沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時(shí)能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象）。1．離心：高速離心（10,000rpm）20-30秒，或低速離心（2,000rpm）5分鐘。2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（

抗體的制備方法與原理 2010/03/18: 抗體的制備方法與原理一、抗血清的制備有了質(zhì)量好的抗原，還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩剑拍墚a(chǎn)生質(zhì)量好（特異性強(qiáng)和效價(jià)高）的抗體。（一）用于免疫的動(dòng)物作免疫用的動(dòng)物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實(shí)驗(yàn)室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動(dòng)物種類的選擇主要根據(jù)抗原的生物學(xué)特性和所要獲得抗血清數(shù)量，如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因動(dòng)物反應(yīng)良好，而且能夠提供足夠數(shù)量的血清，用于免疫的動(dòng)物應(yīng)適齡，健壯，無感染性疾患，為///雄性，此外還需十分注意動(dòng)物的飼養(yǎng)，以消除動(dòng)物的個(gè)體

常用抗體的應(yīng)用范圍及選用2010/03/08: 常用抗體的應(yīng)用范圍及選用在臨床活檢工作中，對(duì)于各種腫瘤的正確判斷，歷來是外科病理學(xué)的核心問題。因它關(guān)系到患者的治療和預(yù)后的問題。在免疫組化技術(shù)沒開展以前，主要靠HE，特殊染色和組織化學(xué)來進(jìn)行鑒別和診斷各種腫瘤，這些在當(dāng)時(shí)雖然解決了不少的問題，但是對(duì)于較為復(fù)雜，較為多型性的腫瘤，就不能對(duì)其起源及所含的成分作出正確的判斷。隨著免疫組化工作的開展，給許多以往有待于解釋原因的病理診斷上帶來了福音。許多以往無法解釋原因的病例，經(jīng)現(xiàn)今免疫組化染色技術(shù)的處理后，能夠?qū)ζ淦鹪?，相關(guān)的抗原或抗體成份給予顯示出來，

抗體選擇指南2010/03/04: 抗體選擇指南檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：?分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型?樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)?樣本的種屬?抗體宿主的種類?抗體的標(biāo)記和檢測(cè)1.分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WBIHCICCELASA分析等，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于

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