2D-DIGE定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì組學(xué)是一門以dànbáizhì組為研究對(duì)象，旨在研究細(xì)胞、組織或生物體組成及其變化規(guī)律的學(xué)科。自從1975年O'Farrell和Klose等人建立雙向凝膠電泳技術(shù)（2-DE）以來(lái)，2-DE技術(shù)憑借其高靈敏度和高分辨率、便于計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像分析處理、可以很好地與質(zhì)譜分析等鑒定方法匹配等優(yōu)點(diǎn)成為目前dànbáizhì組學(xué)研究的核心手段。

近年來(lái)，dànbáizhì組學(xué)的研究重點(diǎn)已從dànbáizhì的鑒定到量化轉(zhuǎn)移。定量的dànbáizhì組學(xué)研究可定義為多個(gè)樣品間dànbáizhì豐度相對(duì)差異的研究。盡管一些可選擇的或互補(bǔ)的dànbáizhì組學(xué)技術(shù)正在發(fā)展，如同位素親和標(biāo)簽和多維dànbáizhì鑒定技術(shù)，但雙向電泳仍是當(dāng)前僅有的可以同時(shí)分離大量的復(fù)雜的dànbáizhì混合物的關(guān)鍵技術(shù)。

傳統(tǒng)的雙向電泳2-DE在樣品制備、電泳條件及凝膠染色等方面難以保證wánquán一致，因此容易產(chǎn)生膠間差異。這種差異會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)的重復(fù)性不佳，敏感度較低，甚至可能掩蓋真實(shí)的生物學(xué)差異或產(chǎn)生誤導(dǎo)性的假陽(yáng)性結(jié)果。為了解決2-DE技術(shù)存在的缺陷，1997年Unlü et al提出了雙向熒光差異凝膠電泳（Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis，2D-DIGE）。

2D-DIGE 技術(shù)的原理是先用不同的熒光染料標(biāo)記dànbáizhì樣品，再使dànbáizhì變性，然后用固定pH梯度凝膠，根據(jù)dànbáizhì電荷差異分離出不同pH值的dànbáizhì帶，再將此膠條置于含SDS 的聚丙烯酰胺凝膠上，根據(jù)dànbáizhì分子量加以分離，并通過(guò)多通道激光掃描分析不同dànbáizhì的SDS-PAGE凝膠圖像。其主要步驟：用2種不同的熒光染料（Cy2、Cy3 或 Cy5）標(biāo)記要比較的dànbáizhì樣品；等量均勻混合熒光標(biāo)記后的樣品；使用相同的內(nèi)標(biāo)，將混合后的樣品經(jīng)雙向凝膠電泳進(jìn)行分離；在熒光顯微鏡下，用不同的激發(fā)波長(zhǎng)來(lái)檢測(cè)電泳結(jié)果。

圖1. 2D-DIGE技術(shù)的一般流程

2D-DIGE相較于傳統(tǒng)的2-DE具有的顯著優(yōu)勢(shì)：

• 采用熒光標(biāo)記技術(shù)，能同時(shí)比較多個(gè)樣品，提高了實(shí)驗(yàn)效率和準(zhǔn)確性。

• 由于熒光標(biāo)記的引入，使得dànbáizhì的分離和檢測(cè)更加jīngquè，可以檢測(cè)到更細(xì)微的dànbáizhì差異。

• 引入了內(nèi)標(biāo)，更好地消除了試驗(yàn)的偶然誤差，避免了不同凝膠之間的差異，極大地提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信度。

• 不需要進(jìn)行電泳后的固定或脫色過(guò)程，減少了dànbáizhì特別是低分子量dànbáizhì的損失。

• 熒光信號(hào)的數(shù)字化處理使得數(shù)據(jù)的獲取和分析更加快速和準(zhǔn)確。

百泰派克生物科技提供SDS-PAGE和2D-DIGE電泳服務(wù)，結(jié)合Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)與nanoLC-MS/MS納升色譜，為廣大科研工作者提供一站式dànbáizhì組定性及定量服務(wù)。

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