液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 (LC-MS) 組蛋白修飾檢測檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 (LC-MS) 是一種強(qiáng)大的技術(shù)，經(jīng)常用于檢測和定量生物大分子，特別是dànbáizhì和其他生物分子的修飾。組蛋白修飾是一種重要的表觀遺傳現(xiàn)象，涉及到組蛋白的氨基酸殘基（如賴氨酸和jīngānsuān）上的化學(xué)修飾。這些修飾可能包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和其他多種修飾。

圖1.組蛋白翻譯后修飾鑒定研究路線

使用LC-MS進(jìn)行組蛋白修飾檢測的一般步驟

• 樣品制備：從生物樣品中提取組蛋白，然后進(jìn)行水解，得到組蛋白肽段。

• 肽段富集：對于某些特定的修飾（例如磷酸化），可能需要使用特定的親和層析技術(shù)（例如IMAC或TiO2柱）來富集被修飾的肽段。

• 液相色譜分離：使用液相色譜（LC）將肽段分離。通常，逆相高效液相色譜 (RP-HPLC) 是shǒuxuǎn的方法。

• 質(zhì)譜分析：分離的肽段進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn)行電離和檢測。離子通常通過碰撞誘導(dǎo)解離 (CID) 或其他碎片化技術(shù)得到肽段的碎片。

• 數(shù)據(jù)分析：使用專門的軟件分析質(zhì)譜數(shù)據(jù)，以確定肽段的序列以及存在的修飾。例如，磷酸化會增加80道爾頓的質(zhì)量，而乙酰化會增加42道爾頓。

• 定量分析：通過比較不同樣品中修飾肽段的相對豐度，可以進(jìn)行定量分析，了解修飾的動態(tài)變化。

LC-MS在組蛋白修飾研究中的應(yīng)用:

• 鑒定組蛋白修飾位點(diǎn): 通過LC-MS，研究人員可以鑒定dànbáizhì序列中特定的修飾位點(diǎn)，從而了解這些修飾是如何影響基因表達(dá)的。

• 定量分析組蛋白修飾: 除了鑒定修飾位點(diǎn)，LC-MS還允許研究人員定量分析不同修飾的豐度。這可以幫助了解在某些生理或病理?xiàng)l件下哪些修飾增加或減少。

• 多重修飾的分析: 很多時(shí)候，一個(gè)組蛋白可能同時(shí)存在多種修飾。LC-MS有能力區(qū)分和鑒定這些復(fù)雜的修飾模式。

隨著技術(shù)的進(jìn)步，LC-MS在靈敏度、分辨率和速度上都有了顯著的提高。此外，新的前處理和富集技術(shù)也在不斷發(fā)展，使得低豐度的修飾更容易被檢測。zuì后，隨著大數(shù)據(jù)分析方法的發(fā)展，處理和解釋LC-MS數(shù)據(jù)的軟件工具也在不斷進(jìn)步。

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