以下是山羊低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒的綜合使用說明，整合自多個(gè)廠商的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程：

　　BS-3859 山羊低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒 天津本生試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法：包被微孔板的捕獲抗體與樣本中LDL結(jié)合后，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后通過450nm吸光度定量。

　　二、試劑盒組成

　　典型配置包括：

　　酶標(biāo)包被板(48T/96T)

　　標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度通常為0-48ng/ml)

　　酶標(biāo)試劑(HRP標(biāo)記抗體)

　　顯色劑A/B液(TMB溶液)

　　終止液(酸性溶液)

　　20-30倍濃縮洗滌液

　　樣品稀釋液及封板膜

　　三、樣本處理要求

　　血清/血漿?：

　　采集后室溫靜置10-30分鐘，2000-3000g離心20分鐘取上清

　　避免溶血或反復(fù)凍融(建議分裝保存于-20℃)

　　組織勻漿?：

　　按1:9比例加入PBS勻漿，3000g離心10分鐘取上清

　　細(xì)胞上清?：

　　3000g離心10分鐘去除顆粒物

　　四、操作步驟

　　試劑準(zhǔn)備?：

　　所有試劑需平衡至室溫(18-25℃)

　　濃縮洗滌液需用蒸餾水稀釋

　　加樣?：

　　每孔依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μL→酶標(biāo)試劑50μL→37℃孵育60分鐘

　　洗滌?：

　　棄液后拍干，每孔加滿洗滌液靜置30秒，重復(fù)5次

　　顯色?：

　　加入顯色劑A/B各50μL，37℃避光反應(yīng)15分鐘

　　終止與檢測(cè)?：

　　加終止液50μL，15分鐘內(nèi)測(cè)定450nm OD值

　　五、注意事項(xiàng)

　　不同批次試劑不得混用

　　顯色劑B需避光保存

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線需每次實(shí)驗(yàn)重新制備

　　OD值>2.0時(shí)需稀釋樣本復(fù)測(cè)

　　精密度要求：批內(nèi)CV<10%，批間CV<12%

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，通過回歸方程計(jì)算樣本濃度。典型檢測(cè)范圍為0.17-4.2mmol/L。

　　注：以上資料僅供參考，具體操作參數(shù)請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說明書為準(zhǔn)，不同廠商可能存在細(xì)微差異。

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