實驗方法原理    溶血空斑試驗，又稱空斑形成細胞（Plague Forming Cell, PFC）試驗，是一種體外檢測抗體形成細胞的方法。將一定量洗滌過的綿羊紅細胞注射入小鼠腹腔，四天后將小鼠殺死，取脾臟制成脾細胞懸液，內(nèi)含抗體形成細胞。然后將脾細胞、綿羊紅細胞，補體混合孵育。由于PFC 所分泌的抗體和綿羊紅血球結(jié)合形成抗原抗體復合物，在補體作用下可使紅細胞溶解，于特制的小室內(nèi)形成肉眼可見的溶血空斑。一個空斑即代表一個抗體形成細胞。
實驗材料    ICR小鼠
試劑、試劑盒    綿羊紅血球補體
儀器、耗材    解剖器械試管吸量管載玻片石蠟盤酒精燈微量加樣器
實驗步驟    
1.  小鼠免疫及脾細胞懸液的制備
 
將5 ％SRBC0.4 ml注射于小鼠腹腔，4 天后拉脫頸椎處死，取出脾臟放在已加入6 ml Hank's液的平皿中。在100 目不銹鋼網(wǎng)上研磨，過濾混勻，從中吸取1 ml加入試管中，加滿Hank's液混勻，離心1000 rpm，10 分鐘。將沉淀的脾細胞恢復1 ml容積，即為約1×107 /ml濃度的細胞懸液。 
 
2.  制作小室 
 
取無脂載玻片（75 mm×25 mm）, 平置桌面上。用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個小室。將此雙層玻片的一側(cè)長邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊（無需浸入過深，以能封閉小室邊緣為準）。 
 
3.  小室灌注細胞懸液 
 
取 1×107 /ml脾細胞懸液100 μl
10 ％SRBC 200 μl
新配補體 200 μl
Hank's液 1 ml 
混勻后，用尖吸管灌注小室、蠟封、標記、平放于玻片盤內(nèi)，置37 ℃孵箱30—45 分鐘。
收起 
注意事項    
1.  小室注入液體時不要留有氣泡。
 
2.  小室邊緣需用石蠟封嚴。

3.  37℃孵箱孵育時，必須放平，不可傾斜。 
 
4.  觀察結(jié)果時，應(yīng)注意辨別空斑與氣泡的區(qū)別，避免將氣泡誤認為溶血空斑。 

收起 
其他    
一、實驗結(jié)果
 
觀察小室內(nèi)的透明空斑，一個空斑即代表一個空斑形成細胞（PFC），即B細胞。