關(guān)于血清的一些討論

1、 血清的主要成分和功能

牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中對細(xì)胞的生長增殖具有重要甚至是難以替代的作用，它含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成分。主要有以下成分和功能：

A、 血清中的主要物質(zhì)—蛋白質(zhì)如白蛋白等具有緩沖細(xì)胞培養(yǎng)液酸堿度、維持滲透壓的作用。

B、 轉(zhuǎn)鐵蛋白、甲狀腺素結(jié)合蛋白等結(jié)合蛋白，有識別維生素、脂類、金屬和其它激素等，并能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，從而起到解毒作用。

C、 纖維粘連素、胎牛血清中的胎球蛋白、貼壁因子等能促進(jìn)細(xì)胞貼壁、鋪展。

D、 多肽類如血小板促生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、神經(jīng)細(xì)胞生長因子、胰島素、類胰島素生長因子、促生長激素等能支持細(xì)胞分裂增殖并維持細(xì)胞對數(shù)生長。

E、 2巨球蛋白等蛋白酶抑制劑能抑制蛋白酶，保護(hù)細(xì)胞不受損害。

F、 血清中還含有豐富的氨基酸、葡萄糖、酮酸及與蛋白相結(jié)合狀態(tài)的微量元素等，對細(xì)胞培養(yǎng)均有意義。

正因?yàn)檠寰哂腥绱藦?fù)雜的成分和重要的功能，所以血清的保存和使用顯得非常重要。

2、 保存血清的方法：

我們建議血清應(yīng)保存在-15℃至-20℃，有效期為5年，若存放于4℃時(shí)，請勿超過四周，若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。不宜反復(fù)凍融。配制成*培養(yǎng)基后應(yīng)在四周內(nèi)用完。

3、 血清解凍后有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理：

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后也會存在于血清中，也是造成沉淀物的主要原因之一，但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質(zhì)量，若您欲除去這些沉淀，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以直接過濾的方式去除這些沉淀物，因?yàn)樗赡軙枞倪^濾膜。

4、 如何解凍血清才不會使血清質(zhì)量受損：

我們建議您將血清從冷藏箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融，但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

5、 為什么要熱滅活血清：

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦您使用熱滅活血清。

6、 有必要做熱滅活嗎：

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)細(xì)胞而言是不需要的，經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，類似于“小黑點(diǎn)”形狀，這常常會讓研究者誤認(rèn)為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱滅活處理，如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量！

7、 如何避免沉淀物的產(chǎn)生：

我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列操作：

A、 解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時(shí)改變的溫度太大（如-20℃至37℃），實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

B、 解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

C、 請勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，從而影響血清質(zhì)量。

D、 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可無須做此步驟，若必須做血清的熱滅活，請嚴(yán)格遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。