十六、cDNA 末端快速擴增 (rapid amplification of cDNA ends,RACE)技術

cDNA 末端快速擴增 (rapid amplification of cDNA ends,RACE)技術是一種基于mRNA反轉錄和 PCR技術建立起來的、以部分的已知區(qū)域序列為起點,擴增基因轉錄本的未知區(qū)域,從而獲得mRNA(cDNA)完整序列的方法。簡單的說就是一種從低豐度轉錄本中快速增長cDNA5’和cDNA3’末端，進而獲得獲得全長cDNA簡單而有效的方法，該方法具有快捷、方便、等優(yōu)點,可同時獲得多個轉錄本。因此近年來RACE技術已逐漸取代了經(jīng)典的cDNA文庫篩選技術,成為克隆全長cDNA序列的常用手段。

十七、基因文庫和cDNA文庫的構建（看課本上的）

十八、mRNA差異顯示技術（DD-PCR）

mRNA差異顯示技術是將mRN A逆轉錄技術和PCR技術相結合的一種RNA指紋圖譜技術。每一種細胞（包括同一組織細胞經(jīng)過不同的處理）都有其特異表達的不同于其他組織細胞的基因譜（有差異基因表達），即特異的RNA指紋圖譜。差異基因表達是細胞分化的基礎，正是這些基因在細胞中的特異表達與否，決定了生命歷程中細胞的發(fā)育和分化、細胞周期調(diào)節(jié)、細胞衰老和凋亡等。mRNA DDR T－PCR 技術正是對組織特異性表達基因進行分離的一種快速而行之有效的方法。 其基本原理是從基因背景相同的2個或幾個被比較的細胞系或組織中提取總RNA，逆轉錄成cDNA ，用不同引物對，進行PCR 擴增，擴增時加入同位素標記的核苷酸。利用測序膠電泳技術分離PCR 產(chǎn)物，經(jīng)放射自顯影即可找到差異表達的基因。

十九、抑制差減雜交

抑制差減雜交技術原理抑制差減雜交技術(SSH)是由Diatchenko等建立的以抑制性PCR和DNA差減雜交方法相結合的方法。其依據(jù)的主要技術有兩點:(1)消減雜交;(2)抑制PCR。經(jīng)抑制差減雜交后的cDNA群體不僅富集了差異表達基因(目的基因),而且目的基因間豐度的差異經(jīng)過均等化作用已基本消除,使消減后的cDNA群體為豐度一致的目的基因群體。

抽提兩種不同來源組織的mRNA(tester和driver),反轉錄成 cDNA,用4堿基識別酶(RsaI)或HaeIII酶切兩種cDNA產(chǎn)生平端片段;將testerc DNA分成均等的兩份,分別接上dapter1和adapter2兩種接頭,并與過量的經(jīng)RsaI消化的driver樣本變性后退火雜交。*次雜交后有4種產(chǎn)物:a是單鏈testercDNA;b是自身退火的testercDNA雙鏈;c是tester和driver的異源雙鏈;d是drivercDNA。

根據(jù)復性動力學原理,豐度高的單鏈cDNA退火時產(chǎn)生同源雜交速度快于豐度低的單鏈cDNA,因此*次雜交使得豐度有差別的cDNA的單鏈分子的相對含量趨向一致?；旌蟽煞蓦s交樣品,同時加入新的變性driver cDNA 進行第二次消減雜交。雜交*后補平末端,加入合適引物(即adapter1和adapter2的部分特異序列)進行PCR擴增,只有含不同接頭的雙鏈DNA分子(e)才可進行指數(shù)擴增,擴增產(chǎn)物即為目的片段。利用adapter上的酶切位點可進行克隆、測序等。

二十、蛋白質(zhì)芯片

二十一、Northern blot

二十二、Southern blot