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士瑞化工克隆/建庫/表達超級感受態(tài)細胞

來源:上海士瑞化工實業(yè)有限公司   2013年09月27日 07:30  

--克隆大DNA:包括表達質粒,基因組DNA克隆
--構建質粒文庫:減少DNA大小偏倚性,使全長cDNA克隆、雙雜交質粒等各種大小的質粒轉化效率更接近,提高文庫代表性(比DH10B高25倍)。

Hte 基因型
Hte(轉化)基因型是Stratagene開發(fā)的特異性提高大質粒、連接DNA的宿主菌基因型,并使細胞生長加快(當天獲得菌落),已經(jīng)成功應用于25kb超螺旋DNA和8kb連接DNA的克隆。XL10-Gold®,BL21-Gold,BL21-CodonPlus®,SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列細胞都帶有這個新的性狀。

超級感受態(tài)細胞
Stratagene提供多種>5 x 109 轉化子/μg 超螺旋DNA轉化效率的化學法超級感受態(tài)細胞正是克隆獲得大質粒、連接DNA克隆和建庫時zui值得推薦的。

電轉化感受態(tài)細胞
Stratagene的電轉化感受態(tài)細胞特別耐受電擊處理,方便好用,在DNA材料極珍貴、量少時,或構建有代表性文庫時,建議采用電轉化感受態(tài)細胞。ElectroTen-Blue®細胞是目前商品化的電轉化感受態(tài)細胞中效率zui高的,達到>3 x 1010 轉化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue,XL1-Blue MRF’,SURE®,ABLE® 和TG1等細 胞也提供電轉化形式感受態(tài)細胞。

SURE®-克隆不穩(wěn)定DNA
大腸桿菌DNA修復系統(tǒng)會針對重復序列、二級結構(如Z-DNA)等真核DNA進行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細胞針對uvrC,umuC,SbcC和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進行突變,提高了真核來源、不規(guī)則DNA的穩(wěn)定性達20倍以上,并且適合克隆甲基化DNA。提供化學和電轉化感受態(tài)細胞,效率分別達1x1010 和1x109。

ABLE®-克隆毒性DNA
目的DNA的蛋白產(chǎn)物常常對細胞產(chǎn)生毒性,通常的解決辦法是采用低拷貝質粒,或者采用極為嚴緊的表達調控。為了獲得穩(wěn)定的克隆,ABLE細胞減少ColE來源質粒的拷貝數(shù)(如pUC、pBluescript系列載體),以達到保持相對較高拷貝數(shù)的同時使本底表達對于細胞的毒性降至zui低的效果。

MR系列®-克隆甲基化DNA
真核基因組DNA常常因高度甲基化而被大腸桿菌修飾系統(tǒng)切割、刪除,在構建文庫時,由于要對cDNA進行甲基化保護,某些cDNA克隆也較難完成。采用Stratagene的MR (Minus Restriction)突變刪除了修飾系統(tǒng)的感受態(tài)細胞,可以構建質量非常高的cDNA和基因組文庫。這些細胞包括:用于大質粒克隆的XL10-Gold®超級感受態(tài)細胞,克隆連接DNA、轉化效率 目前zui高的ElectroTen-Blue®電轉化感受態(tài)細胞,單次反應包裝的SoloPack® Gold,以及XL2-Blue MRF´ ,XL1-Blue MRF´ Kan(四環(huán)素抗性質粒),XL1-Blue MR(沒有F´附加體),克隆有二級結構的SURE細胞等。

 

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