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液相色譜儀操作(三)

來源:許昌瑞泰豐科技有限公司   2010年03月02日 13:45  

三、沖洗

    使HPLC系統(tǒng)良好運行的第三個要點是保持系統(tǒng)的清潔。你需要關(guān)注流動相流經(jīng)該系統(tǒng)的所有地方,對于這些地方經(jīng)常性的沖洗,將使你的系統(tǒng)保持在“Ready”狀態(tài)。

1、流動相儲液瓶

    首先要經(jīng)常清洗流動相儲液瓶,或者每做一批新樣品更換一次流動相。一個臟的儲液瓶將會污染注入的流動相。建議儲液瓶中緩沖液使用時間不要超過一周,而有機(jī)溶劑使用時間不要超過一個月。也有人建議儲液瓶中保持用溶劑充滿,直到更換分析方法儲液瓶需更換新溶劑(流動相組成發(fā)生變化)時,將舊溶劑倒掉更換新溶劑,這樣勝于將溶劑用完。但這對于分析樣品量少的實驗室而言似乎有些浪費。儀器公司的工程師建議儲水瓶的水要天天換,每周瓶子還應(yīng)該用異丙醇清洗一次。有的實驗室則在水里加入0.1~1 mM的甲酸抑制微生物的生長。這些做法看起來有些繁瑣,但卻能起到“磨刀不誤砍柴工”作用。

2、泵

    接下來要沖洗的是泵。千萬不要一分析完沖幾分鐘后就停泵,特別是當(dāng)流動相中含有難揮發(fā)的緩沖液(如磷酸鹽)時。如果儀器不是連續(xù)使用,當(dāng)流動相蒸發(fā)時,難揮發(fā)物就會粘在活塞密封墊的表面,難揮發(fā)物將形成固形物沉淀。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以,無論使用長短,在停泵以前一定要用非緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上,要是流動相中有難揮發(fā)緩沖鹽則建議沖洗的時間應(yīng)該更長些。

3、自動進(jìn)樣器

    自動進(jìn)樣器也要按規(guī)定清洗。現(xiàn)在的儀器多配有自動進(jìn)樣器的沖洗液瓶,通常只要注意及時更換、補(bǔ)充沖洗液即可。自動進(jìn)樣器用的洗滌液也要采用與流動相相同的方式處理,并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定,清洗儲液瓶或更換洗滌液?,F(xiàn)在的自動進(jìn)樣器設(shè)置、操作都很簡單,如果時間允許(特別是利用夜間運行),每次分析完后設(shè)置進(jìn)1、2針純?nèi)軇ㄈ缂状?、乙腈),也是一個好做法。

4、色譜柱

    對柱子的污染是隨使用時間而增加。通常表現(xiàn)是:運行走基線時在記錄的色譜圖中基線噪音增加,泵壓也增加。解決這個問題的zui有效方法就是在每一批樣品分析結(jié)束后或準(zhǔn)備卸下柱子時用大量的流動相沖洗柱子(例如,甲醇、乙腈和水)。用梯度沖洗效果更好,具體的比例要根據(jù)柱子的說明書和性質(zhì)而定。

5、檢測器

    如果是正常使用,檢測器將依據(jù)其性質(zhì)并按照說明書規(guī)定進(jìn)行洗。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器,在對柱子和系統(tǒng)進(jìn)行沖洗時也就一同對檢測器流通池中污染物進(jìn)行了清洗。但是蒸發(fā)光檢測器或質(zhì)譜儀則需要按照說明書進(jìn)行定期清洗。這些檢測器在使用時會有難揮發(fā)污染物沉積,如質(zhì)譜儀離子源的噴針、毛細(xì)管、錐孔板、預(yù)四極等部件,因而需要定期清洗。而且對聯(lián)有這些檢測器的系統(tǒng)沖洗時,與這些檢測器斷開,以減少對檢測器的污染。
    總之,實驗室日常使用的液相色譜儀要是能認(rèn)真做好這三項工作——脫氣、過濾和沖洗,你的儀器可以得到良好的預(yù)防性維護(hù),使用時就會感到比較順手。當(dāng)然,在實際操作時遇到的問題并沒有這么簡單,但這三個良好習(xí)慣將是正確操作、使用HPLC系統(tǒng)的基礎(chǔ)。

 

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