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目的建立風疹病毒RNA TaqMan實時熒光定量RT-PCR方法,制備風疹病毒RT-PCR擴增子作為該方法的參考標準品。方法設計引物與探針,優(yōu)化PCR條件,建立風疹病毒RNA實時熒光定量RT-PCR方法,并制備風疹RT-PCR擴增子作為該方法的參考標準品。結(jié)果制備的風疹特異性擴增子參考標準品為503 bp的片斷,原液濃度為2.75×109copies/μl,純度為92%;采用該特異性擴增子參考標準品建立的標準曲線相關(guān)系數(shù)r為-0.9993（r2=0.9986）,P<0.001。結(jié)論本研究建立的風疹特異性擴增子參考標準品穩(wěn)定性好,純度高;特異性擴增子參考標準品濃度的對數(shù)值與Ct值之間具有良好的線性關(guān)系,證實了本研究建立的風疹RNATaqMan實時熒光定量RT-PCR方法定量的準確性。因而,建立的風疹RNA實時熒光定量RT-PCR方法簡便快捷、定量準確,可用于臨床標本中風疹RNA的定量檢測。
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