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用Iodixanol分離人血液?jiǎn)魏思?xì)胞

來源:廣州市默菲儀器有限公司   2013年05月07日 12:46  

 

所需儀器:XL03RH型控溫離心機(jī)(低速冷凍離心機(jī),可使用24*15ml離心管,水平轉(zhuǎn)子)
1)   將30ml血液加到含有Na2EDTA的抗凝管里(終濃度5.5mmol/L)
2)   制備1.084g/cm3和1.065g/cm3 Iodixanol溶液
方法如下:
Iodixanol:60% Iodixanol溶液(Optiprep)
稀釋介質(zhì):RPMI 1640 + 10%胎牛血清。
1.084g/cm3溶液:1.5ml 60% Optiprep + 4.5ml稀釋介質(zhì)
1.065g/cm3 溶液:3ml 60% Optiprep + 13.4ml稀釋介質(zhì)
3)   全血在570g離心15分鐘,棄去上層血漿,取出淡黃色層并與0.4體積的Optiprep混合。
4)   把富含白細(xì)胞的血漿/ Optiprep混合物轉(zhuǎn)移到離心管,上面按順序加入2ml 1.084g/cm3溶液、4ml 1.065g/cm3 溶液和0.5ml稀釋介質(zhì)。
5)   用甩開吊籃轉(zhuǎn)子700g離心15分鐘。
6)   降速過程中不制動(dòng),收集分界面處的細(xì)胞,并且稀釋介質(zhì)稀釋。
7)   在400g離心6分鐘,把細(xì)胞懸浮于適當(dāng)介質(zhì)里備用。

湖南湘立研制生產(chǎn)的幾款醫(yī)用離心機(jī)可以用來進(jìn)行細(xì)胞分離,如DL5M/TDL5M兩種型號(hào)的低速冷凍離心機(jī)可用來進(jìn)行干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。XL03RH型控溫離心機(jī)(低速冷凍離心機(jī))可用來進(jìn)行溫度敏感型人體細(xì)胞分離。

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