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原位 ELISA方法的優(yōu)化

來源:上海伊麗薩生物科技有限公司   2013年03月19日 15:36  

       盡管登革熱在世界上是通過蚊子傳播的病毒性疾病,遺憾的是目前還沒有具體而有效的治療登革熱感染的抗體。是有一種安全,抗登革熱病毒的藥物,以減少總的臨床表現(xiàn)的病人.

           要做到這一點,有一項必須滿足的要求。一種抗登革熱的藥物應該有一個簡單的給藥途徑,穩(wěn)定,長的保質(zhì)期、價格要求合理。藥物的臨床療效,必須對四種所有登革熱血清在初期和中期的DENV感染有一定控制。

因此,發(fā)現(xiàn)登革熱病毒的特異性是迫在眉睫的事情。在改善疾病的情況下,可以有效識別登革病毒感染的抑制劑,96孔格式的基于細胞的ELISA法來檢測。它允許測試藥物覆蓋范圍廣、分析則依賴自動板讀數(shù)器。一種原位 ELISA法先行進行,然后用診斷,監(jiān)測以及血清流行病學等相關(guān)研究的方法。而IgMIgG抗體的檢測則是使用感染的蚊子細胞作為抗原進行,然而,很少有報道使用原位 ELISA法作為抗登革熱的藥物篩選技術(shù)。原位 ELISA 命名作為基于單元的黃病毒免疫檢測(CFI)法,它被用來在A549細胞中的111種化合物中篩選登革熱病毒的復制方法。相同檢測方法,用于評估由腺苷核苷抑制登革病毒RNA的合成。為了獲得更好的結(jié)果,幾個方面的分析都得同時優(yōu)化進行。對固色劑的試劑進行了評價,使用的是有機溶劑的甲醇和丙酮。細胞的固定過程顯示出更好的結(jié)果,用Triton X-1002A)與多聚甲醛進行通透來顯示。*固定過程的另一個優(yōu)點是,它與沉淀蛋白質(zhì)和溶解脂在細胞膜中的可滲透的抗體在相同的時間內(nèi)同時進行。此外,它與阻斷非特異性反應在用2%脫脂牛奶或5FBS中表現(xiàn)出類似的效率,故被選定為2%脫脂乳。

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