zui常用的雙功能劑是戊二醛。它的兩個(gè)醛基能與抗體（或其它蛋白質(zhì)）和HRP的氨基或羥基結(jié)合，而使二者偶聯(lián)在一起。常用二步標(biāo)記法，即*步先使戊二醛的一個(gè)醛基與HRP的氨基結(jié)合，第二步再使戊二醛的另一個(gè)醛基與抗體的氨基結(jié)合。用此法所得的HRP-抗體結(jié)合物中，HRP與抗體皆為單體，分子量為200kD左右，抗體與酶活性保存60%左右，缺點(diǎn)是結(jié)合率不高。戊二醛二步法（AVrameas-Ternyck法，）具體操作步驟為：取辣根過氧化物酶10 mg溶于0.1 mol/L PBS（pH 6.8）中，配成含1.25％戊二醛溶液0.2 ml，室溫放置18h。用生理鹽水透析或經(jīng)葡聚糖凝膠G-25除去戊二醛，用生理鹽水補(bǔ)充至l ml。加入含5 mg抗體的生理鹽水溶液l ml和l mol/L（pH9.5）碳酸鹽緩沖液0.1 ml，混勻后在4℃放置24h。 加0.1 ml 0.2 mol/L賴氨酸溶液，室溫中放置2h。用半飽和硫酸銨沉淀三次，透析除去硫酸銨，離心（1000 rpm，30min），取上清分裝凍存，或加入等量60％甘油的PBS，4℃貯存。用前1 mg蛋白加入1 mg小白鼠肝粉末吸收，除去非特異反應(yīng)物質(zhì)。

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