手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
（一） 原理
酶免疫電鏡技術(shù)是利用酶的率的催化作用對其底物的反應(yīng)形成不同的電子密度，借助于電子顯微鏡觀察，證明酶的存在，從而對抗原進行定位。
（二）材料與試劑
1．PBS液 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。
2．DAB溶液 取5mgDAB（3、3二氨基聯(lián)苯胺）加入10mlTris－HCl緩沖液（0.05mMol/L pH 7.6），加1%H2O20.5ml～1ml。配制時，避光進行，現(xiàn)用現(xiàn)配。在顯色完成沖洗過程中，要保持流水沖洗，防止非特異性物質(zhì)積于標(biāo)本上。
3．戊二醛固定液 取50ml 0.2Mol/L PBS緩沖液與25%戊二醛按以下比例配制：
0.2Mol/LPBS液 50 50 50 50 50
25%戊二醛（ml） 4 6 8 10 12
重蒸餾水（ml） 46 44 42 40 28
固定液終濃度（%） 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
（三）操作方法
1．酶標(biāo)抗體的制備 疫酶技術(shù)章。
2．取材 將培養(yǎng)細(xì)胞或懸浮細(xì)胞用0.1Mol/L PBS液沖洗，離心沉淀后，立即轉(zhuǎn)入固定液（2%甲醛液或2%戊二醛液均可）pH 7.2，4℃固定5min～30min（依抗原性質(zhì)所定）。如病料為組織塊，則取適當(dāng)大小，先固定1h然后取出，以新的雙面刀片切成50～100µm的薄組織再行固定1h～2h。
3．漂洗 以PBS液漂洗過夜，換液3～4次。
4．血清孵育，25℃1h或4℃過夜，孵育的標(biāo)本放置于加蓋的瓷盤內(nèi)，底層墊數(shù)層紗布。防止抗血清干燥凝固，不易洗脫，造成非特異性吸附。
5．PBS沖洗3～4次，每次10min。
6．2.5%戊二醛再固定15min～30min。
7．PBS液沖洗3～4次每次10min。
8．酶標(biāo)記抗體孵育；用適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗體（即工作濃度）于25℃濕盆內(nèi)孵育1h或4℃過夜。
9．PBS液沖洗3～4次每次10min或4℃漂洗過夜。
10．酶顯色處理 將漂洗后的標(biāo)本浸入DAB－H2O2底物溶液中，20℃，10min～30min。顯色強弱與戊二醛的固定有關(guān)。若顯色弱則可減少甚至取消戊二醛的固定時間。沖洗時必須注意防止非特異漂浮的沉積。
11．常規(guī)包埋、切片、電鏡觀察 在經(jīng)過脫水包埋確定抗原性不致引起失活的前提下可在包埋切片后做標(biāo)記染色，切片一般在2µm～4µm，切片后染色不存在通透困難的問題。無論在標(biāo)記染色后切片還是在切片后標(biāo)記染色，在光鏡下定位選擇后，再做電鏡定位包埋，這樣目的性強，可減少工作量。
（四）結(jié)果判定
在已知陽性、陰性樣品成立的前提下，凡出現(xiàn)棕色顆粒，即指示抗原抗體的存在，同時可觀察到病毒顆粒的存在，判為陽性（＋），否則判為陰性（－）。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心