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用人血清進(jìn)行噬菌體ElISA

來源:上海寶葉生物科技有限公司   2012年09月18日 08:58  
 
[器材和試劑]
● 包被緩沖液
● PBST
● PBBST[PBS,1%TritonX—100,3% BSA(Sigma)]
● 兔抗人Fc—特異性IgG(Pierce):用包 被緩沖液稀釋為5.0ug/ml①
● HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體(Amersham Biosciences):用封閉液以1/10000比例 稀釋
● 顯色液[3,3’,5,5’—四甲基聯(lián)苯胺 (TMB)液體底物系統(tǒng),Sigma]
 
[方法]
1.將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過夜。
2.用PBST洗滌多孔板。
3.加250ul PBBST。37℃孵育2小時(shí)。
4.棄去PBBST,將200ul噬菌體上清等量加入各孔。每孔中加入0.25ul血清,37℃振 蕩孵育60分鐘。
5,用PBST洗滌板孔。
6.加200gl HRP標(biāo)記的羊抗噬菌體抗體。37℃振蕩孵育30分鐘。
7.用PBST洗滌板孔。
8.每孔中加200ul顯色液。室溫避光孵育15分鐘。加25ul 2mol/L H2S04終止反應(yīng)。分 析前在酶標(biāo)儀中振蕩10秒。
9.用自動(dòng)酶標(biāo)儀將A405和A655間的差值作為結(jié)果記錄。

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