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MSC培養(yǎng)基使用Q&A:解鎖間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)的黃金法則

來源:上?,|馳儀器有限公司   2025年08月20日 16:55  

充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)作為再生醫(yī)學(xué)的“明星選手”,其培養(yǎng)質(zhì)量直接決定實驗成??!而培養(yǎng)基的選擇與操作更是核心中的核心。針對高頻痛點,我們整理了一份超實用指南,助你避開培養(yǎng)雷區(qū)!

01Q:基礎(chǔ)培養(yǎng)基怎么選?DMEM/F12、α-MEM還是低糖DMEM?

A:沒有絕對,關(guān)鍵看細(xì)胞來源和應(yīng)用場景!

骨髓/脂肪來源MSC:經(jīng)典選擇α-MEM(含核苷/維生素,促增殖)

臍帶/胎盤來源MSC:傾向低糖DMEM(更貼近生理微環(huán)境)

需神經(jīng)/成骨分化:可選DMEM/F12(營養(yǎng)更均衡)

02Q:血清必須用胎牛血清(FBS)嗎?能用替代品嗎?

A:FBS仍是主流,但無血清培養(yǎng)是趨勢!



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重要提示

若用FBS,必須熱滅活(56℃ 30min)以消除補(bǔ)體影響;轉(zhuǎn)換無血清培養(yǎng)時,需梯度適配(按比例混合新舊培養(yǎng)基過渡)。

03Q:培養(yǎng)基多久換液一次?顏色變黃就要換嗎?

A:看細(xì)胞密度,別只看顏色!

活躍增殖期(<80%密度):每2-3天換液(即使未變黃);

高密度/靜止期(>90%):每天換液(避免代謝廢物堆積);

急救場景(pH驟降變橙黃):立即換液+檢查CO?濃度!

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進(jìn)階技巧

換液前輕晃培養(yǎng)瓶,觀察細(xì)胞貼附穩(wěn)定性——若大量漂浮,警惕污染或消化過度!

04Q:添加劑(bFGF、EGF等)怎么加?現(xiàn)用現(xiàn)配嗎?

A:生長因子必須分裝凍存,避免反復(fù)凍融!

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配制貼士

用含0.1% BSA的PBS溶解生長因子(減少吸附損失);

分裝單次用量(如bFGF按5-10ng/ml,每支裝50μl),-80℃保存;

使用前融化后4℃暫存≤1周。

05Q:培養(yǎng)的MSC突然不貼壁/分化異常,是培養(yǎng)基的鍋嗎?

A:可能!但需系統(tǒng)排查→ 按此順序自檢:

1. 培養(yǎng)基:

是否新開瓶?檢測pH值(正常:7.2-7.4)

添加劑是否失活?(換新批次驗證)

2. 操作因素:

消化時間是否過長?(理想狀態(tài):細(xì)胞邊緣卷曲即終止)

傳代比例是否過低?(MSC推薦1:2~1:3,高代次勿低于1:4)

3. 環(huán)境控制:

CO?濃度是否偏離5%?

水盤是否干涸導(dǎo)致濕度不足?

埃澤思生物依托其技術(shù)平臺,開發(fā)了大量細(xì)胞治療和醫(yī)藥生產(chǎn)用的高值培養(yǎng)基類產(chǎn)品,目前核心產(chǎn)品超過60種,并可實現(xiàn)定制開發(fā)及生產(chǎn)。其中核心產(chǎn)品已經(jīng)完成美國FDA DMF備案以及國家藥品評審中心(CDE)藥物原輔料備案,是國內(nèi)資質(zhì)較為齊全的細(xì)胞治療原料供應(yīng)商。

產(chǎn)品推薦

增強(qiáng)型人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(AC-1001009)



1.高效增殖能力、明顯降低單位細(xì)胞生產(chǎn)成本;

2.傳代20代,細(xì)胞依然保持良好的形態(tài)與分化能力;

3.無動物源,成分確定,可以明顯減少批間差異,確保每一批次產(chǎn)品的高效能和穩(wěn)定性;

4.符合細(xì)胞藥物研發(fā)標(biāo)準(zhǔn),可以進(jìn)行藥物研發(fā)申報。

數(shù)據(jù)展示

1.增殖能力



埃澤思增強(qiáng)型人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(hMSC Medium Plus)在3天內(nèi)顯著提高了細(xì)胞增殖率,細(xì)胞數(shù)量達(dá)競品的兩倍

2.穩(wěn)定傳代,持久效能



埃澤思增強(qiáng)型人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(hMSC Medium Plus)經(jīng)過嚴(yán)格的測試可以穩(wěn)定傳代20代,并且保持著增殖和分化能力。

3.流式檢測



埃澤思增強(qiáng)型人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(hMSC Medium Plus)能夠穩(wěn)定維持高代次陽性標(biāo)志物在98%以上。圖為P12代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物的檢測。



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