細(xì)胞能量代謝服務(wù)Seahorse XF實(shí)驗(yàn)---（常見問題及解答）

01. 是否可以使用過期或重復(fù)使用的探針板？

解答：安捷倫無法保證使用過期或重復(fù)使用探針板的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有效性。為確保數(shù)據(jù)真實(shí)可靠，請使用在有效期內(nèi)的探針板及配套耗材。

02. 探針板水化時間超過建議時長如何處理？

解答：安捷倫建議將探針板置于 37℃無 CO?培養(yǎng)箱中過夜水化以獲得最佳效果（最短水化時間為 12 小時）。若需延長水化時間（最長 72 小時），需定期補(bǔ)充或更換校準(zhǔn)液，并在培養(yǎng)箱中放置水盤維持濕度，避免液體蒸發(fā)。

03. 不同 Fluxpak 探針板的區(qū)別是什么？

解答：探針板是 Fluxpak 的核心組件，每套 Fluxpak 包含探針板、水化板、校準(zhǔn)液和細(xì)胞培養(yǎng)微孔板，具體配置因型號而異。探針板不可單獨(dú)訂購，需通過購買 Fluxpak 獲取，而細(xì)胞培養(yǎng)板和校準(zhǔn)液可單獨(dú)采購。訂購前請確認(rèn)儀器型號及實(shí)驗(yàn)次數(shù)，選擇配套的 Fluxpak。

04. 實(shí)驗(yàn)前一天需要做哪些準(zhǔn)備？

解答：實(shí)驗(yàn)前一天需完成以下操作：

1. 開機(jī)并啟動 Wave 軟件，確保儀器與軟件連接（狀態(tài)顯示為      "Connected"）；

2. 對探針板進(jìn)行水化處理；

3. 提前將貼壁細(xì)胞接種至 Seahorse 細(xì)胞培養(yǎng)板。

05. 探針板水化是否需要分兩步進(jìn)行？

解答：是的。對于 96 孔探針板，建議采用兩步法水化：

• 實(shí)驗(yàn)前一天用無菌水水化；

• 實(shí)驗(yàn)當(dāng)天棄去無菌水，更換為 37℃預(yù)熱的校準(zhǔn)液，再孵育 1 小時，可zui大程度減少探針頭氣泡。
       24 孔探針板可一步法水化，但建議使用前手動排除氣泡。

06. 能否僅使用探針板的部分孔位？

解答：為確保藥物成功注入細(xì)胞孔，建議水化整個探針板，并按字母標(biāo)識（如 A、B、C、D 組）對所有加藥孔統(tǒng)一加樣。背景校正孔的加藥孔也需加入等量液體，否則可能導(dǎo)致加藥失敗。

07. 為何必須設(shè)置背景校正孔？

解答：背景校正孔用于排除溫度、緩沖能力等非代謝因素對氧含量和 pH 測量的干擾，同時可監(jiān)測整板溫度波動，輔助排查實(shí)驗(yàn)異常原因。

08. 如何設(shè)置背景校正孔？

解答：背景校正孔除不接種細(xì)胞外，其余操作與細(xì)胞孔一致：

• 96 孔板：設(shè)置為 4 個角孔（A1、A12、H1、H12）；

• 24 孔板：設(shè)置為（A1、B4、C3、D6）；

• 孔內(nèi)僅加入培養(yǎng)液（無細(xì)胞）。

09. 為何細(xì)胞培養(yǎng)板需在 37℃無 CO?培養(yǎng)箱中放置 45-60 分鐘？

解答：目的是使培養(yǎng)液脫氣并釋放 CO?，避免干擾細(xì)胞外酸化率（ECAR）的測量。

10. 能否通過增加細(xì)胞接種量提高檢測信號？

解答：需優(yōu)化細(xì)胞密度，建議接種密度以覆蓋培養(yǎng)板底部 80%-90% 面積為宜。可設(shè)置密度梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳值。細(xì)胞過密會導(dǎo)致微環(huán)境中氧氣快速耗盡，影響數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。

11. Seahorse 實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞接種方法與常規(guī)培養(yǎng)有何不同？

解答：使用安捷倫細(xì)胞培養(yǎng)板時，需注意：

• 加樣時槍頭與孔壁呈 45° 角貼壁加入，加樣后靜置 1 小時促進(jìn)細(xì)胞均勻分布，減少邊緣效應(yīng)；

• 96 孔板每孔接種體積 80 μL；

• 24 孔板分兩步加樣：先加 100 μL 細(xì)胞懸液，待細(xì)胞貼壁后補(bǔ)加 150 μL 培養(yǎng)基至總體積 250 μL，避免沖散貼壁細(xì)胞。

12. 使用細(xì)胞黏附劑處理培養(yǎng)板是否影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果？

解答：不影響。經(jīng) poly-L-Lysine、fibronectin、Gelatin 等黏附劑處理的培養(yǎng)板，不會干擾 XF 儀器對代謝參數(shù)的測量。

13. XFp/XFe96 細(xì)胞培養(yǎng)微孔板的孔體積和底面積是多少？

解答：最大體積 275 μL，底面積為標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板的 40%（0.11 cm2）。

14. XFe24 細(xì)胞培養(yǎng)微孔板的孔體積和底面積是多少？

解答：最大體積 1000 μL，底面積與標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板相同（0.28 cm2）。

15. 檢測液中是否需要添加抗生素？

解答：無需添加。多數(shù) XF 實(shí)驗(yàn)可在數(shù)小時內(nèi)完成，無需抗生素維持無菌環(huán)境。

16. 能否在檢測液中添加血清（如 FBS）？

解答：不建議添加。血清會降低檢測液緩沖能力，可能與藥物發(fā)生非特異性結(jié)合，且易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致加藥失敗或數(shù)據(jù)偏差。

17. 檢測液和藥物能否提前配制？

解答：檢測液需實(shí)驗(yàn)當(dāng)天現(xiàn)配，藥物需現(xiàn)用現(xiàn)溶，剩余溶液不可重復(fù)使用。

18. 糖酵解壓力試劑盒中的藥物狀態(tài)異常（如 2-DG 呈固體或混合態(tài)）是否影響質(zhì)量？

解答：不影響。例如 2-DG 可能以透明液體、白色固體或固液混合態(tài)存在，均屬正常現(xiàn)象，可按說明書溶解使用。

19. 使用 pH 7.4 的 XF DMEM/RPMI 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制檢測液時，是否需要調(diào)整 pH？

解答：無需調(diào)整。XF 配套底物可確保培養(yǎng)基終 pH 值準(zhǔn)確（7.4±0.1）。非 XF 品牌的補(bǔ)充劑可能影響 pH 穩(wěn)定性，需謹(jǐn)慎使用。開封后的基礎(chǔ)培養(yǎng)基建議 1 個月內(nèi)用完，避免因吸收空氣中 CO?導(dǎo)致 pH 波動。

20. Seahorse 基礎(chǔ)培養(yǎng)基與其他品牌有何差異？

解答：XF 培養(yǎng)基專為代謝檢測優(yōu)化，特點(diǎn)包括：

• 無碳酸氫鹽、低緩沖容量，便于 ECAR 檢測；

• 無預(yù)添加底物，適應(yīng)多樣化實(shí)驗(yàn)需求；

• 低酚紅或無酚紅，避免干擾 pH 測量。

21. 進(jìn)行脂肪酸氧化（FAO）實(shí)驗(yàn)時，能否通過探針板自動注射 BSA - 棕櫚酸酯？

解答：建議將 BSA - 棕櫚酸酯等底物預(yù)先加入培養(yǎng)基處理細(xì)胞。如需上機(jī)時注射此類底物（如血清、脂質(zhì)復(fù)合物），請聯(lián)系安捷倫技術(shù)支持確認(rèn)可行性。

22. 為何不能使用含酚紅的 XF 基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行糖酵解速率（Glycolytic rate）和實(shí)時 ATP 速率（real-time ATP rate）實(shí)驗(yàn)？

解答：酚紅會干擾這兩項實(shí)驗(yàn)中 pH 變化的準(zhǔn)確測量，需使用無酚紅培養(yǎng)基。

23. 能否用 GlutaMAX 替代谷氨酰胺（Glutamine）？

解答：不建議。GlutaMAX 需經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為谷氨酰胺，可能影響線粒體對谷氨酰胺氧化的動力學(xué)分析，建議直接使用谷氨酰胺配制檢測液。

24. 檢測液 pH 對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響有多大？

解答：至關(guān)重要。XF 實(shí)驗(yàn)通過監(jiān)測氧消耗和質(zhì)子釋放（OCR/ECAR）反映代謝活動，檢測液 pH（37℃時需維持 7.4±0.1）直接影響代謝物的解離狀態(tài)和測量準(zhǔn)確性。

25. FluxPak 中的水化板能否替代細(xì)胞培養(yǎng)板？

解答：不能。水化板與細(xì)胞培養(yǎng)板結(jié)構(gòu)相似，但僅用于探針板水化，不可用于細(xì)胞培養(yǎng)。

26. 探針板加藥時需注意哪些細(xì)節(jié)？

解答：

• 加藥時槍頭與加藥孔壁呈 45° 角貼壁注入，保持板子水平，避免液體漏入水化板；

• 24 孔板加藥前需移除粉色水化輔助板；

• 加藥后避免晃動探針板。

27. 細(xì)胞板上機(jī)時的操作要點(diǎn)？

解答：將探針板和細(xì)胞板按 A1 孔朝向儀器內(nèi)部的方向放入卡槽，確保蓋子已移除，避免遮擋檢測探頭。

28. 代謝數(shù)據(jù)如何通過 Seahorse XF 報告生成器計算？

解答：各試劑盒對應(yīng)的《Seahorse XF 報告生成器用戶指南》中詳細(xì)列出了計算公式，請參考說明書操作。

29. Wave 數(shù)據(jù)分析軟件是否可免費(fèi)下載安裝？

解答：是的，可在安捷倫（鏈接）免費(fèi)下載并安裝。

30. 儀器模板庫中缺少目標(biāo)試劑盒的模板怎么辦？

解答：可通過 Wave 軟件將實(shí)驗(yàn)?zāi)０鍖?dǎo)出至 U 盤，再導(dǎo)入儀器模板庫中。

31. 軟件導(dǎo)出選項中無對應(yīng) Report Generator 怎么辦？

解答：請至安捷倫 “細(xì)胞分析軟件” 欄目下載最新 Wave 軟件，或在對應(yīng)試劑盒頁面下載專用 Report Generator（下載鏈接）。

32. Wave 軟件無法安裝時如何處理？

解答：可使用 Seahorse Analytics 云分析平臺（鏈接），通過網(wǎng)頁端安全存儲、訪問和分析數(shù)據(jù)，簡化流程。

33. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是否需要?dú)w一化處理？常用方法有哪些？

解答：歸一化是數(shù)據(jù)解析的關(guān)鍵步驟，需根據(jù)細(xì)胞類型、處理條件等選擇統(tǒng)一參數(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。常用方法包括蛋白定量、細(xì)胞成像計數(shù)、核 DNA 檢測等。

34. 為何 Fluxpak 包裝中細(xì)胞板數(shù)量多于實(shí)驗(yàn)需求？

解答：安捷倫考慮到實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)細(xì)胞密度過高等異常情況，額外配備細(xì)胞板以便重新鋪板。

35. Seahorse 相關(guān)試劑的存儲條件是什么？

解答：

• 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：4℃避光保存，避免凍結(jié)；

• FAO 試劑、谷氨酰胺：-20℃凍存；

• 探針板及試劑盒：室溫儲存。

36. 如何獲取 Seahorse 試劑盒說明書？是否有中文版本？

解答：試劑盒標(biāo)簽上的二維碼可直接掃碼下載電子版說明書。部分試劑盒提供中文說明書，可聯(lián)系技術(shù)支持索取。

37. 簡述 Seahorse XFe24 組織胰島板的特點(diǎn)？

解答：僅 24 孔機(jī)型配備組織胰島微孔板，特點(diǎn)包括：

• 腔室容積 16.6 μL；

• 網(wǎng)狀捕獲篩孔徑 125 μm，適用于胰島等組織樣本。

38. 如何快速判斷實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是否可靠？

解答：參考正常范圍值：

• 24 孔板：基礎(chǔ) OCR 50-400 pmol/min，基礎(chǔ) ECAR 20-120 mpH/min；

• 96 孔板：基礎(chǔ) OCR 20-160 pmol/min，基礎(chǔ) ECAR 10-90 mpH/min。

39. 24/96 孔微孔板的物理參數(shù)對比