百歐博偉生物：以下是關于山梨醇（乳酸菌）發(fā)酵試驗的原理及使用方法的綜合說明，結(jié)合微生物學檢測標準與研究整理而成：

一、實驗原理

1、培養(yǎng)基組成與功能

碳源與生長因子：蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供基礎營養(yǎng)；吐溫80為乳酸菌提供必需生長因子，優(yōu)化其生長環(huán)境。

凝固劑：少量瓊脂（1.5 g/L）防止氣體擴散，維持厭氧條件。

指示系統(tǒng)：溴甲酚紫（1.4 ml/ L）作為pH指示劑，發(fā)酵產(chǎn)酸時由紫色變黃色（陽性），無變化則保持紫色（陰性）。

發(fā)酵底物：山梨醇（5 g/L）為可發(fā)酵糖源，菌株代謝能力決定顏色變化。

2、代謝機制

乳酸菌發(fā)酵山梨醇產(chǎn)生乳酸等有機酸，降低培養(yǎng)基pH，觸發(fā)指示劑變色。此過程可特異性區(qū)分菌種（如植物乳桿菌陽性變黃，瑞士乳桿菌陰性不變色）。

二、標準操作步驟

1、培養(yǎng)基配制

按以下配方制備（以1L為例）：

成分      用量

蛋白胨    5.0 g

牛肉浸粉  5.0 g

酵母浸粉  5.0 g

吐溫80    0.5 ml

瓊脂      1.5 g

山梨醇    5.0 g

1.6%溴甲酚紫酒精溶液  1.4 ml

pH        7.4±0.2（25℃）

2、實驗流程

（1）菌懸液制備：

從純培養(yǎng)物中挑取單菌落，用生理鹽水稀釋至0.5麥氏濁度（約10? CFU/ml）。

（2）接種與培養(yǎng)：

吸取0.05 ml菌懸液加入含培養(yǎng)基的安瓿瓶或試管中。

36±1℃厭氧培養(yǎng)18-24小時。

（3）結(jié)果判讀：

陽性：培養(yǎng)基整體變黃（山梨醇發(fā)酵產(chǎn)酸）。

陰性：保持紫色或藍綠色（無發(fā)酵能力）。

三、質(zhì)量控制與結(jié)果解釋

質(zhì)控菌株示例：

菌種        結(jié)果   現(xiàn)象

植物乳桿菌  陽性   培養(yǎng)基變黃

瑞士乳桿菌  陰性   培養(yǎng)基紫色不變

注意事項：

需結(jié)合其他生化試驗（如糖發(fā)酵譜、VP試驗）綜合鑒定菌種，避免假陽性/陰性。

培養(yǎng)時間超過24小時可能導致弱陽性菌株變色，需嚴格控時。

四、應用場景

1、乳酸菌鑒定：

區(qū)分乳桿菌屬、雙歧桿菌屬等菌種的代謝特性，如植物乳桿菌（陽性）與瑞士乳桿菌（陰性）。

2、病原菌研究：

山梨醇代謝能力與致病性相關。例如：

艱難梭菌ST54譜系利用宿主山梨醇增殖，加重炎癥性腸病（IBD）患者感染；限制山梨醇攝入可降低感染風險。

3、工業(yè)發(fā)酵優(yōu)化：

調(diào)控山梨醇濃度（至38%）可提升山梨糖產(chǎn)量（達360 mg/mL），用于維生素C生產(chǎn)。

添加乳酸菌（如植物乳桿菌）改善青貯飼料品質(zhì)，提升乳酸含量84.6%，降低氨態(tài)氮38.5%。

五、注意事項與常見問題

1、假陰性風險：

接種菌量不足或培養(yǎng)溫度偏差可能導致結(jié)果異常，需嚴格遵循濁度與溫度參數(shù)。

2、指示劑失效：

溴甲酚紫遇光易降解，培養(yǎng)基應避光保存，有效期通常為1年（常溫/冷藏）。

3、擴展應用：

非培養(yǎng)狀態(tài)的乳酸菌可抑制后酸化，延長發(fā)酵食品貨架期。

附：流程圖快速指南

此試驗是乳酸菌分類的核心方法，結(jié)合代謝機制與工業(yè)場景，可為菌種篩選、致病機制研究及生產(chǎn)工藝優(yōu)化提供關鍵依據(jù)。

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