從常規(guī)到全譜:氨基酸測(cè)定儀的檢測(cè)能力解析與技術(shù)演進(jìn)
氨基酸測(cè)定儀作為生命科學(xué)領(lǐng)域的關(guān)鍵分析設(shè)備,其檢測(cè)范圍直接決定了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析、營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究及臨床診斷的深度。隨著色譜分離技術(shù)與質(zhì)譜檢測(cè)方法的迭代升級(jí),現(xiàn)代氨基酸測(cè)定儀已實(shí)現(xiàn)從傳統(tǒng)20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸到50余種稀有氨基酸的全譜覆蓋。
一、基礎(chǔ)檢測(cè)范圍:20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的精準(zhǔn)定量
傳統(tǒng)氨基酸分析儀基于離子交換色譜-茚三酮柱后衍生法,可穩(wěn)定檢測(cè)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生的20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸,包括:
1.必需氨基酸(8種):異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸
2.非必需氨基酸(12種):丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸、組氨酸
該技術(shù)體系通過(guò)pH梯度洗脫實(shí)現(xiàn)基線分離,檢測(cè)限可達(dá)0.1pmol級(jí)別,滿足食品營(yíng)養(yǎng)標(biāo)簽、飼料配方優(yōu)化等常規(guī)檢測(cè)需求。
二、技術(shù)擴(kuò)展能力:稀有氨基酸的突破性檢測(cè)
1.衍生化增強(qiáng)技術(shù)
采用6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞胺氨基甲酸酯(AQC)等新型衍生試劑,可額外檢測(cè):
①含硫氨基酸:?;撬?、胱硫醚
②修飾氨基酸:羥脯氨酸、羥賴氨酸
?、巯∮邪被幔壶B氨酸、瓜氨酸、β-丙氨酸
2.多維色譜聯(lián)用
通過(guò)親水相互作用色譜(HILIC)與反相色譜(RPC)串聯(lián),實(shí)現(xiàn)二肽、三肽等短肽片段的分離檢測(cè)。某品牌AAA-400型儀器已實(shí)現(xiàn)37種氨基酸及短肽的同步分析。
3.質(zhì)譜增強(qiáng)檢測(cè)
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)的引入,使檢測(cè)范圍擴(kuò)展至:
①D-型氨基酸(如D-絲氨酸):檢測(cè)限達(dá)0.5fmol
?、谖被幔ㄈ缥腚装彼幔?/div>
?、蹮晒鈽?biāo)記氨基酸(如5-羥色氨酸)
三、前沿應(yīng)用場(chǎng)景:全譜氨基酸組學(xué)研究
在系統(tǒng)生物學(xué)研究推動(dòng)下,部分儀器已具備檢測(cè)57種氨基酸及其代謝物的能力,涵蓋:
1.神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān):γ-氨基丁酸、牛磺酸
2.能量代謝相關(guān):α-氨基丁酸、β-氨基異丁酸
3.氧化應(yīng)激標(biāo)志物:3-硝基酪氨酸、羧甲基賴氨酸
某研究團(tuán)隊(duì)利用全譜氨基酸分析技術(shù),在阿爾茨海默病模型小鼠腦脊液中發(fā)現(xiàn)12種差異代謝氨基酸,為疾病早期診斷提供了新標(biāo)志物。
技術(shù)發(fā)展趨勢(shì):隨著毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)(CE-LIF)等新技術(shù)的成熟,未來(lái)氨基酸測(cè)定儀將實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞水平氨基酸代謝動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。實(shí)驗(yàn)室在選型時(shí)應(yīng)根據(jù)研究需求權(quán)衡檢測(cè)范圍、通量與成本,建議優(yōu)先選擇支持方法開發(fā)的模塊化儀器平臺(tái)。
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