高效液相色譜儀(HPLC)作為現(xiàn)代分析實驗室的核心設(shè)備，其穩(wěn)定運行對實驗結(jié)果至關(guān)重要。本文將系統(tǒng)介紹HPLC的操作規(guī)范、日常維護要點及常見故障處理方法，幫助實驗人員延長儀器壽命，確保數(shù)據(jù)準確性。

規(guī)范操作流程

開機準備是HPLC分析的第一步關(guān)鍵環(huán)節(jié)。流動相必須使用HPLC級溶劑，并通過0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣10-20分鐘以去除溶解氣體。安裝色譜柱時需注意流向標識，新柱應(yīng)先用低流速(0.2-0.5mL/min)平衡，避免突然加壓損壞柱床。

分析方法建立時，初始流速不宜過高，建議從1.0mL/min開始逐步提升。對于含緩沖鹽的流動相，需特別注意pH范圍(通常2-8)，超出范圍會損傷硅膠基質(zhì)色譜柱。梯度洗脫結(jié)束后，應(yīng)用初始比例流動相沖洗色譜柱至少30分鐘，使系統(tǒng)重新平衡。

關(guān)機程序同樣重要。先降低流速至0.1mL/min，依次關(guān)閉檢測器、柱溫箱和泵。若使用緩沖鹽流動相，必須先用5-10倍柱體積的水沖洗，再用有機相(如甲醇)沖洗保存。長期不用時，色譜柱應(yīng)充滿保存溶劑(反相柱用甲醇，正相柱用正己烷等)，兩端密封。

日常維護要點

流動相管理直接影響基線穩(wěn)定性。水相流動相建議現(xiàn)配現(xiàn)用，存放不超過2天，防止微生物滋生。溶劑瓶吸濾頭每月應(yīng)拆下超聲清洗(10%硝酸10分鐘，純水沖洗)。在線脫氣機需定期檢查膜管狀態(tài)，出現(xiàn)變色或破損及時更換。

泵系統(tǒng)維護重點關(guān)注密封圈和單向閥。建議每3-6個月更換泵密封圈，當壓力波動>5%時應(yīng)檢查單向閥。清洗單向閥時需注意安裝方向，用甲醇超聲10分鐘后純水沖洗。帶seal-wash功能的儀器要定期補充清洗液(90%水+10%異丙醇)。

進樣系統(tǒng)是交叉污染的高發(fā)區(qū)域。自動進樣器針頭和針座建議每年更換，出現(xiàn)彎曲、毛刺或堵塞時立即更換。六通閥轉(zhuǎn)子密封墊同樣需年度更換，磨損會導(dǎo)致峰形拖尾和殘留。手動進樣器使用后應(yīng)用純水-甲醇交替沖洗裝載和進樣位置各3-4mL。

檢測器維護主要針對流通池。基線噪聲突然增大可能是流通池污染，可拆下用甲醇超聲清洗，注意勿刮傷石英窗。UV檢測器氘燈壽命約1000小時，強度低于50%時應(yīng)考慮更換。

常見故障處理

壓力異常是最常見問題。壓力持續(xù)升高通常由堵塞引起，應(yīng)按保護柱→在線過濾器→柱前篩板→色譜柱的順序排查。壓力波動多因泵內(nèi)有氣泡或單向閥故障，可通過大流量沖洗(3-4mL/min甲醇)或超聲清洗單向閥解決。

漏液故障需根據(jù)位置處理。接頭處漏液先檢查是否擰緊，仍漏則更換密封墊。泵頭漏液多因密封圈磨損，應(yīng)停機更換。檢測器漏液常見于流通池窗口墊片老化，需使用專用工具更換。

色譜峰異常原因多樣。鬼峰可能來自樣品污染或進樣系統(tǒng)殘留，應(yīng)沖洗系統(tǒng)并檢查轉(zhuǎn)子密封墊。峰分叉多因色譜柱性能下降或保護柱失效，可更換保護柱或反向沖洗色譜柱。保留時間漂移需檢查柱溫穩(wěn)定性(±0.5℃內(nèi))和流動相組成。

通過規(guī)范的日常操作、定期維護和及時故障排查，可顯著提高HPLC的穩(wěn)定性和使用壽命。建議實驗室建立詳細的儀器使用和維護日志，記錄耗材更換日期、故障現(xiàn)象及處理措施，為后續(xù)維護提供參考。