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關(guān)于Calcein,AM 鈣黃綠素乙酰甲酯的介紹

來源:上海索寶生物科技有限公司   2025年07月23日 13:41  

  Calcein, AM是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Calcein,從而被滯留在細胞內(nèi),發(fā)出強綠色熒光。與其它同類試劑(如 BCECF, AM和CFDA)相比,Calcein, AM的細胞毒性很低。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長分別為 490 nm和515 nm。
      Calcein, AM僅對活細胞染色。作為核染色染料的PI 不能穿過活細胞的細胞膜,它穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核,并嵌入細胞的 DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(激發(fā):535 nm,發(fā)射:617 nm),因此 PI 僅對死細胞染色。由于 Calcein和PI-DNA 都可被490 nm激發(fā),因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用545 nm激發(fā),僅可觀察到死細胞。根據(jù)以上特點,Calcein, AM和PI 經(jīng)常被結(jié)合用來作為活細胞和死細胞的雙重染色。 
      由于不同細胞系的最佳染色條件不同,我們建議個別確定Calcein, AM 和PI的合適濃度。  
操作說明:
     (1)用DMSO 制備1 mM 的Calcein, AM溶液,并用PBS 將其稀釋制成1~50μM的Calcein, AM溶液①。
     (2)將1/10 細胞培養(yǎng)基體積的Calcein, AM溶液加入到細胞培養(yǎng)基中②。
     (3)在37℃培養(yǎng)細胞15~30分鐘。 
     (4)用PBS 或適當?shù)木彌_液洗滌細胞兩次。 
     (5)用490 nm激發(fā)波長,515 nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。 
注意:

      如果Calcein, AM很難進入細胞,可以使用表面活性劑,如Pluronic F127 。 
      也可以用1/10 濃度的Calcein, AM溶液代替培養(yǎng)基。 


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