用途:
通過 5 周 2 針的標準免疫程序制備小鼠單克隆和多克隆抗體,ELISA 滴度(Cutoff值為 0.1000)可達到 1:10000~1:10000000。
備注:
常溫運輸,2-8oC 保存,無菌取用,有效期 12 個月。(切勿凍存?。?br style="outline: none !important; margin: 0px; padding: 0px;"/>使用方法:
1. 用生理鹽水將抗原稀釋到 2 倍最終濃度(按每針次 50μl 用量配制)。備注:推薦使用的抗原用量為(1)免疫原性較弱的亞單位蛋白抗原每針次 5-20μg;(2)免疫原性較強的滅活全病毒或全細菌以及病毒樣顆粒抗原每針次 1-5μg;(3)偶聯(lián)了載體蛋白的小分子抗原每針次 20-50μg。
2. 充分混勻佐劑,無菌條件下取出所需用量(按每針次 50μl )與抗原按體積比 1:1 迅速混勻。備注:本佐劑產(chǎn)生沉淀屬正?,F(xiàn)象,與抗原混合操作越快越好。
3. 通過后腿小腿肌肉注射免疫小鼠,每只小鼠注射 100μl。 。備注:本佐劑與抗原混合后產(chǎn)生沉淀屬正?,F(xiàn)象,抽入針管前應充分混勻,抽入針管后應盡快注射。
4. 第 21 天按同樣方式加強免疫 1 針。備注:每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。
5. 第 35 天采微量尾血進行 ELISA 測定,抗體滴度應在 1:10000-1:10000000 范圍內(nèi),隨后即可采全血或按常規(guī)方法進行抗原沖擊免疫和脾細胞融合。
與常規(guī)使用的弗氏佐劑相比,SoFastAntibody免疫佐劑具有免疫周期短、針次少、無需乳化、抗原用量低、抗體滴度高、抗體親合力高、易獲得構(gòu)象型表位的抗體等多方面優(yōu)點,詳述如下:
1.SoFastAntibody只需兩針免疫,無論是用于單克隆還是多克隆抗體制備,與弗氏佐劑相比可減少免疫針次。
2.SoFastAntibody通過減少免疫針次和降低每針次抗原用量,從而可大大節(jié)省總抗原用量。推薦使用的抗原用量為(1)免疫原性較弱的亞單位蛋白抗原每針次5-50μg(通常為小鼠5-20μg,兔子20-50μg);(2)免疫原性較強的滅活全病毒或全細菌以及病毒樣顆粒抗原每針次1-10μg(通常為小鼠1-5μg ,兔子5-10μg)。
3.SoFastAntibody抗體產(chǎn)生快,抗體滴度高,抗體親合力高。以標準免疫程序為例,無論是用于單克隆還是多克隆抗體制備,只需要在三周內(nèi)進行兩針免疫,通常在第五周即可獲得ELISA滴度(Cutoff值為0.1000)高達1:10000-1:10000000的高親合力抗體水平。
4.SoFastAntibody不破壞抗原天然構(gòu)象,從而易于篩選獲得針對構(gòu)象型抗原表位的單克隆抗體,這是弗氏佐劑所不具備的一個重要特點。
5.SoFastAntibody是一類水溶性佐劑,使用時不需要弗氏佐劑的復雜乳化過程,抗原和佐劑只需簡單混合即可用于免疫動物。
6.SoFastAntibody使用肌肉免疫途徑,與常規(guī)小鼠單克隆抗體制備過程中使用足墊免疫或脾內(nèi)免疫相比,極大地方便了使用。
7.SoFastAntibody的一個重要用途是可方便地用于制備小鼠多克隆抗體。常規(guī)多克隆抗體制備多使用兔子,不但免疫針次多、抗原用量大和抗體產(chǎn)生慢,而且由于技術(shù)要求較高而往往需要委托專門單位制備。使用SoFastAntibody免疫佐劑,任何實驗動物人員均可方便快速地制備小鼠多克隆抗體,標準免疫程序只需要簡單地免疫5只小鼠,即可在五周后獲得1ml高質(zhì)量的小鼠多克隆抗體。(強烈推薦使用本佐劑制備小鼠多克隆抗體,1ml高質(zhì)量的小鼠多克隆抗體足以滿足絕大多數(shù)用戶的實驗需求,包括用于酶聯(lián)免疫、免疫印跡、流式細胞、免疫組化和免疫沉淀等)。
8.SoFastAntibody建議常溫運輸,2~8oC保存,無菌取用,有效期12個月。
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