Agilent MHC 2D-LC/Q-TOF

大分子表征的應(yīng)用案例-Peptide

一維分離：Infinity II 1260 生物惰性液相色譜（四元），配備 VWD 檢測器

反相分離，A 相：0.088M 磷酸二氫銨溶液（pH 3.6）：乙腈=9：1（V：V，pH 3.8±0.1），B相：乙腈

二維分離：Infinity II 1290 超高效液相色譜系統(tǒng)（二元），質(zhì)譜兼容的反相體系

質(zhì)譜：6545XT AdvanceBio Q-TOF

數(shù)據(jù)采集及處理軟件：Masshunter 及 BioConfirm 12.1

對司美格魯肽主峰前后的 10 個雜質(zhì)進行質(zhì)譜鑒定，其中 Cut6 的一級分子量比主成分多 106Da，結(jié)合文獻并使用 BioConfirm12.1 軟件自定義編輯修飾進行匹配，鑒定結(jié)果顯示該修飾發(fā)生在 25 位上的色氨酸（Trp）上（紅色方框所示）發(fā)生羥基芐基化修飾，其 y6 離子與主成分一致，而 y7、y8 以及 y9 等均比主成分多 106Da，進一步說明修飾發(fā)生在 25 位-Trp上。

圖 4. 司美格魯肽雜質(zhì)鑒定的一級質(zhì)譜圖以及雜質(zhì)（25 色氨酸-羥基芐基化修飾）二級質(zhì)譜匹配圖

一維分離：Infinity II 1260 生物惰性液相色譜（四元），配備 VWD 檢測器

反相分離，A 相：0.088M 磷酸二氫銨溶液（pH 3.6），乙腈=9：1（V：V，pH 3.8±0.1）；B相：乙腈

二維分離：Infinity II 1290 二元超高效系統(tǒng)，質(zhì)譜兼容的反相體系

質(zhì)譜：6545XT AdvanceBio Q-TOF

數(shù)據(jù)采集及處理軟件：Masshunter 及 BioConfirm12.1

1 針進樣，使用 HiRes 對司美格魯肽主峰進行連續(xù) 10 片切割（從色譜峰的起始至結(jié)束）。該 10 片組分依次通過第二維色譜系統(tǒng)洗脫至質(zhì)譜進行檢測。以 cut1 為例，cut1 中包含比主峰小 101Da 的雜質(zhì)，通過解卷積后的質(zhì)譜含量為 75%（主峰解卷積響應(yīng)/（主峰解卷積響應(yīng)+雜質(zhì)解卷積響應(yīng)））。綜合所有 10 個 cuts 的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，得出主峰的質(zhì)譜純度為 99.72%。

圖 5. HiRes 應(yīng)用案例 司美格魯肽主峰純度分析的色譜圖以及質(zhì)譜純度結(jié)果

Agilent MHC 2D-LC/6230 TOF

大分子表征的應(yīng)用案例-Oligo

一維分離：Infinity II 1260 生物惰性液相色譜（四元），配備 VWD 檢測器

離子交換分離，A 相：20mM Tris-HCl（pH 8.5），B 相：1M NaClO₄ 溶解在 A 相

二維分離：Infinity II 1290 二元超高效系統(tǒng)，質(zhì)譜兼容的反相體系，使用 ASM 功能降低上樣時的鹽濃度，保證 oligo 在二維反相離子對體系的保留，實現(xiàn)質(zhì)譜鑒定

質(zhì)譜：Agilent 6230 TOF

數(shù)據(jù)采集及處理軟件：Masshunter 及 BioConfirm12.1

使用帶有 ASM 功能的 MHC 系統(tǒng)，1 針進樣對 Oligo 樣品主峰前后 9 個不同時間段進行鑒定，如圖所示 cut1 和 cut2 的解卷積后分子量差值為 535.1Da，可根據(jù)序列信息進一步推測雜質(zhì)類型。

圖 6. Oligo 雜質(zhì)分析的色譜結(jié)果以及部分解卷積結(jié)果

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