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改良Y培養(yǎng)基的檢驗原理與使用方法及應(yīng)用研究!

來源:北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司   2025年06月30日 16:39  

一、背景

 

改良Y培養(yǎng)基用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌,成分(g/L)蛋白胨15.0;氯化鈉5.0;乳糖10.0;草酸鈉2.0;去氧膽酸鈉6.0;三號膽鹽5.0;丙酮酸鈉2.0;孟加拉紅0.04;水解酪蛋白5.0;瓊脂 17.0;pH值7.4±0.1,25℃。

 

檢驗原理:蛋白胨、水解酪蛋白在培養(yǎng)基中作為營養(yǎng)物質(zhì)提供菌體細胞生長所需要的氮源、碳源及生長因子等;氯化鈉維持培養(yǎng)基體系滲透壓;乳糖作為可發(fā)酵的碳水化合物;三號膽鹽和去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌生長;丙酮酸鈉和草酸鈉能促進目標菌生長;孟加拉紅作為著色劑;瓊脂作為凝固劑。

 

用法:稱取本品67.0g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,待冷至45-50℃時,傾入無菌平皿。

 

直桿菌到球桿菌,直徑0.5~0.8μm,長1~3μm。無芽孢。不形成莢膜,但在37℃生長或來自體內(nèi)樣品的細胞中的鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)能產(chǎn)生包被。革蘭氏陰性。37℃時不運動。生長在30℃以下時以周生鞭毛運動。

 

鼠疫耶爾森氏菌總是不運動。在普通的營養(yǎng)培養(yǎng)基上生長。在營養(yǎng)瓊脂上培養(yǎng)24h后,菌落半透明到不透明,直徑0.1~1.0mm。生長溫度28~29℃。兼性厭氧,既具有呼吸型代謝又具有發(fā)酵型代謝。氧化酶陰性,接觸酶陽性。除了個別的生物變型(biovars)外,都能還原硝酸鹽成亞硝酸鹽。

 

發(fā)酵葡萄糖和其他碳水化合物產(chǎn)酸,但不產(chǎn)氣或產(chǎn)少量的氣。表現(xiàn)特征常常與溫度有關(guān),一般培養(yǎng)在25~29℃比在37~39℃能呈現(xiàn)出更多的特征性。所研究過的種具有腸桿菌的常見抗原。生境很廣泛(從有生命到無生命),有些種適應(yīng)于特異性寄主。

 

二、應(yīng)用

 

用于生豬屠宰過程中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的調(diào)查及預測模型的研究:

 

從研究該菌的增菌分離方法入手,調(diào)查生豬屠宰過程中耶氏菌的流行分布情況,并應(yīng)用數(shù)學模型預測該菌在冷卻豬肉中的生長動態(tài),為冷卻豬肉生產(chǎn)過程中更好地控制該菌提供有效的理論依據(jù)和技術(shù)手段。

 

1、生豬屠宰過程中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌分離方法的研究對屠宰場屠宰過程中豬的咽喉部位216份樣品感染耶氏菌進行了分離鑒定,分別用改良磷酸鹽緩沖液(PBs)和氯化鎂孔雀綠肉湯(MM)兩種增菌方法,比較CIN-I、改良“Y”和MacConkey瓊脂培養(yǎng)基分離耶氏菌的效果。試驗結(jié)果表明,PBS 26℃快速增菌30±2h后,使用CIN-Ⅰ分離瓊脂培養(yǎng)基可快速分離耶氏菌,提高該菌的檢出率,適合屠宰過程中耶氏菌的分離。

 

2、生豬屠宰過程中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的調(diào)查研究對不同屠宰生產(chǎn)工藝中豬咽喉部位及胴體表面感染的耶氏菌進行調(diào)查研究,確定血清型分布情況及生物型別。結(jié)果表明,本次試驗共檢出22株耶氏菌,為血清型O∶3,O∶8,O∶9和生物2、3型,均屬致病型菌株。該菌主要寄生在健康豬的咽喉部位,在不同屠宰工藝生產(chǎn)過程中對豬胴體表面均有污染,其中燙毛工藝污染較為嚴重。

 

3、冷卻豬肉中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生長動力學模型的預測將特定的耶氏菌接種到無污染的冷卻豬肉表面,托盤包裝后分別在0、5、10和15℃溫度條件下貯藏,建立和驗證了用于預測冷卻豬肉中耶氏菌生長的動力學模型。將不同溫度下得到的耶氏菌生長實驗值用于建立生長動力學模型,表明修正Gompertz方程能很好的描述耶氏菌在冷卻豬肉中的生長動態(tài)。

 

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