HEK293細(xì)胞系是人胚胎腎細(xì)胞系，具有與人類細(xì)胞相似的翻譯后修飾系統(tǒng)，能夠生產(chǎn)出更接近天然人類蛋白的重組蛋白。其在生物制藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，尤其是在細(xì)胞和基因治療（CGT）產(chǎn)品生產(chǎn)中占據(jù)重要地位。許多治療性病毒載體，如慢病毒、腺相關(guān)病毒等，都在 HEK293 細(xì)胞中生產(chǎn)。隨著CGT領(lǐng)域的迅速發(fā)展，HEK293及其衍生細(xì)胞的應(yīng)用前景將更加廣闊。

WHO和各國藥物注冊監(jiān)管機(jī)構(gòu)均對生物制品中外源宿主DNA殘留提出了監(jiān)測和控制要求，以確保生物制品的安全性及質(zhì)量可控性。

WHO和美國FDA現(xiàn)行指導(dǎo)方針推薦成品中殘留DNA不高于10 ng/劑，美國FDA還指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘留DNA不高于100 pg/劑。歐洲藥典通則規(guī)定生物制品殘留DNA限度大多為不超過10 ng/劑。中國藥典2020年版三部規(guī)定，以細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制劑外源宿主細(xì)胞DNA殘留量不能超過100 pg/劑，以細(xì)菌或真菌基質(zhì)生產(chǎn)的疫苗DNA殘留量不能超過10 ng/劑。

除需對DNA的殘留量進(jìn)行控制外，DNA殘留片段大小分布也是確定其相關(guān)風(fēng)險因素的重要指標(biāo)。有研究表明，一個功能基因至少在200 bp以上，因此大于200 bp有可能會有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風(fēng)險等級越高。

HEK293T細(xì)胞是HEK293細(xì)胞系的衍生物，通過表達(dá)一個溫度敏感的SV40大T抗原突變體而建立。SV40是一種致瘤病毒，其大T抗原（LTA）序列和腺病毒E1A序列具有潛在安全性風(fēng)險。CDE（國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心）頒布的相關(guān)指導(dǎo)原則要求，對包裝病毒載體用細(xì)胞庫（如HEK293T細(xì)胞）攜帶的Adv E1A序列和SV40大T 抗原序列等具有潛在安全性風(fēng)險的特定轉(zhuǎn)化序列，均應(yīng)進(jìn)行殘留控制。

試劑盒線性范圍為：30fg/μL~300pg/μL，R²=1，擴(kuò)增效率為100.45%，各濃度檢測值CV<15%。

圖 1.HEK293 DNA標(biāo)曲線性圖（上）和擴(kuò)增曲線線性圖譜（下）

試劑盒含有四種不同長度的擴(kuò)增片段：82 bp、133 bp、227 bp、515 bp，四片段線性范圍均為30 fg/μL~300 pg/μL，R²＞0.99，擴(kuò)增效率在90%~110%之間，各濃度檢測值CV<15%。

圖2 .82 bp擴(kuò)增曲線圖譜（上）和133 bp擴(kuò)增曲線圖譜（下）

圖3 .227 bp擴(kuò)增曲線圖譜（上）和515 bp擴(kuò)增曲線圖譜（下）

SV40LTA線性范圍在1.8×10¹~1.8×10⁵copies/μL，R²=1，擴(kuò)增效率為100.25%，各濃度檢測值CV<15%；

E1A線性范圍在1.8×10¹~1.8×105copies/μL，R²=1，擴(kuò)增效率為100.25%，各濃度檢測值CV<15%。

圖4 .SV40LTA擴(kuò)增曲線圖譜（左）和E1A擴(kuò)增曲線圖譜（右）