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ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)本處理方法
一、血清的采集、處理和保存
1.真空采血針采集2ml 新鮮血液，加入無(wú)菌試管中。
2.采血后室溫靜置1小時(shí)。
3.將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
4.取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；-20℃下，可放置保存1個(gè)月；-70℃下，可放置保存6個(gè)月。
5.根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w中可能含有含有內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如在冰箱中保存過(guò)久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。
二、血漿的采集、處理和保存
1.真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無(wú)菌試管中。
2.按1:9加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉），30分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以減少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）。
3.將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心5 min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
4.取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；-20℃下，可放置保存1個(gè)月；-70℃下，可放置保存6個(gè)月。
5.根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。請(qǐng)注意指標(biāo)說(shuō)明書(shū)上對(duì)于抗凝血?jiǎng)┦欠裼刑厥庖螅ㄗh使用 EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。注意事項(xiàng)：制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑EDTA, 抗凝不wan全的標(biāo)本因纖維蛋白原干擾而造成假陽(yáng)性。
三、尿液的采集、處理和保存
1.采集尿液樣本500ul加入無(wú)菌試管中。
2.將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10 min，將離心好的樣本留上清，棄下面沉淀。
3.取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；-20℃下，可放置保存 1 個(gè)月；-70℃下，可放置保存6個(gè)月。
4.根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。
四、細(xì)胞上清液的采集、處理和保存
1.采集細(xì)胞培養(yǎng)上清液500ul，加入無(wú)菌試管中。
2.將采集血液用離心機(jī) 4℃，2500rpm 離心 10 min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
3、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；-20℃下，可放置保存1個(gè)月；-70℃下，可放置保存6個(gè)月。
4.根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。
五、各類(lèi)組織勻漿的采集、處理和保存
1.采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱(chēng)重，剔除附屬的結(jié)締組 織，稱(chēng)取組織塊。
2.用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng) 該是組織塊重量的9倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。
3.勻漿的方式有多種：
a) 手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
b) 機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī) 10000～15000r/min 上下研磨制成10％組織勻漿，也可用 內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3～5 次，在冰水中進(jìn)行），皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。
4.將制備好的10％勻漿用離心機(jī)4℃，3000rpm離心15min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
5.取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；-20℃下，可放置保存1個(gè)月；-70℃下，可放置保存6個(gè)月。
6.根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。
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