蛋白定量檢測(cè)試劑用于測(cè)定不同樣本中蛋白質(zhì)濃度
蛋白定量檢測(cè)試劑是用于測(cè)定不同樣本中蛋白質(zhì)濃度的工具,廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、臨床診斷等領(lǐng)域。以下是關(guān)于蛋白定量檢測(cè)試劑的詳細(xì)說(shuō)明,包括其類型、原理、應(yīng)用場(chǎng)景及注意事項(xiàng):
1. 常見蛋白定量檢測(cè)方法
考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法):
原理:考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后發(fā)生顏色變化,在595 nm處有特征吸收峰,吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比。
特點(diǎn):操作簡(jiǎn)便、快速,靈敏度高,但受干擾物質(zhì)影響較大。
適用樣本:純化蛋白質(zhì)、裂解物、血清、血漿等。
二喹啉甲酸(BCA)法:
原理:在堿性條件下,蛋白質(zhì)與Cu2+反應(yīng)生成Cu1+,后者與BCA試劑形成紫色絡(luò)合物,吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比。
特點(diǎn):抗干擾能力強(qiáng)(對(duì)去污劑、甘油耐受性較好),靈敏度稍低于Bradford法,但更穩(wěn)定。
適用樣本:復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物、細(xì)胞裂解液、血清/血漿等。
紫外吸收法(Lowry法):
原理:蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸在280 nm處有特征吸收峰,通過(guò)吸光度計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。
特點(diǎn):無(wú)需試劑,但受核酸、多肽等干擾,靈敏度較低。
適用樣本:純化蛋白質(zhì)、無(wú)核酸污染的樣品。
比濁法(如Peterson法):
原理:蛋白質(zhì)在酸性條件下與酚類物質(zhì)反應(yīng)生成有色復(fù)合物,吸光度與濃度相關(guān)。
特點(diǎn):靈敏度高,但操作復(fù)雜,易受干擾。
熒光法(如熒光染料標(biāo)記法):
原理:熒光染料(如FITC、熒光素)與蛋白質(zhì)結(jié)合后發(fā)出熒光,熒光強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度相關(guān)。
特點(diǎn):靈敏度高,適合低濃度蛋白檢測(cè),但需要熒光檢測(cè)儀。
2. 蛋白定量檢測(cè)試劑應(yīng)用場(chǎng)景:
純化蛋白質(zhì)定量:
用于評(píng)估蛋白質(zhì)純化過(guò)程中的產(chǎn)量和純度。
推薦方法:Bradford法或BCA法。
細(xì)胞裂解物定量:
測(cè)定細(xì)胞裂解液中的總蛋白質(zhì)濃度,用于后續(xù)電泳、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)。
推薦方法:BCA法(抗去污劑干擾)。
血清/血漿定量:
測(cè)定血液中的蛋白質(zhì)濃度,用于臨床診斷或研究。
推薦方法:BCA法或紫外吸收法。
復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物定量:
如組織勻漿、體液等復(fù)雜樣本中的蛋白質(zhì)定量。
推薦方法:BCA法(抗干擾能力強(qiáng))。
稀釋系列標(biāo)準(zhǔn)曲線:
通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)(如BSA)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算未知樣本的蛋白質(zhì)濃度。
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