百歐博偉生物：目前國(guó)內(nèi)各制藥企業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)中微生物的監(jiān)測(cè)方法大多依據(jù)GB/T 16293-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測(cè)試方法和GB/T 16294-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測(cè)試方法進(jìn)行。以這兩個(gè)國(guó)標(biāo)來實(shí)施監(jiān)測(cè)制藥企業(yè)潔凈室的微生物，對(duì)大多數(shù)生產(chǎn)普通制劑或API的廠家來說是沒有問題的。

但是對(duì)于抗生素企業(yè)和部分制劑廠家來說，僅僅按照這兩個(gè)國(guó)標(biāo)推薦的兩種培養(yǎng)基大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）和沙氏瓊脂培養(yǎng)基（SDA）來監(jiān)測(cè)潔凈室的微生物則是不全面的。在抗生素生產(chǎn)企業(yè)，其潔凈室內(nèi)不可避免地混雜著一定量的抗生素粉塵，如果沒有采取能夠消除抗生素粉塵對(duì)微生物生存和生長(zhǎng)的影響的措施，就采用國(guó)標(biāo)的方法測(cè)試該環(huán)境中的微生物，得到的監(jiān)測(cè)結(jié)果，不可避免的將是一個(gè)“假陰性”的結(jié)果；同樣，部分藥物的API對(duì)個(gè)別微生物也有不同程度的抑制或殺滅作用，要是不消除這類影響微生物生存和生長(zhǎng)的環(huán)境因素，同樣會(huì)得到“假陰性”的結(jié)果。

現(xiàn)在國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)制藥企業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)中微生物取樣的培養(yǎng)基是檢驗(yàn)員人工制作，培養(yǎng)基滅菌，澆制平板，預(yù)培養(yǎng)后剔除污染的平板后置冷藏箱內(nèi)待用，保存期限一般不超過3周。采用這樣的方法進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)微生物的取樣，因?yàn)闊o法從根本上保證取樣平板的無菌性，得到的監(jiān)測(cè)結(jié)果不可避免的是一個(gè)“假陽性”的結(jié)果。

“假陰性”和“假陽性”兩個(gè)結(jié)果都沒有真實(shí)的還原潔凈室內(nèi)微生物的實(shí)際狀況。取樣測(cè)試的結(jié)果與潔凈室內(nèi)微生物實(shí)際狀況出現(xiàn)了偏差。這樣的結(jié)果如果發(fā)生的B級(jí)區(qū)，由此產(chǎn)生的眾多調(diào)查、重復(fù)測(cè)試等工作量，將會(huì)導(dǎo)致大量的經(jīng)濟(jì)損失。

“假陰性”和“假陽性”兩個(gè)結(jié)果的產(chǎn)生，就是因?yàn)樵诃h(huán)境監(jiān)測(cè)微生物取樣測(cè)試時(shí)忽視了這樣兩個(gè)問題，忽視了潔凈環(huán)境中存在的抑菌成分；忽視了取樣平板的無菌性。

一、潔凈環(huán)境中的抑菌成分的消除

制藥企業(yè)潔凈環(huán)境中的抑菌成分主要有這樣兩大類：1、API；2、消毒劑殘留。

1、API主要分為這樣兩部分：抗生素和部分API

消除抗生素粉塵的殘留，采用的方法就是降解取樣時(shí)落在培養(yǎng)基平板上的抗生素，在取樣平板的培養(yǎng)基內(nèi)添加一定量的酶，對(duì)于β-內(nèi)酰胺類抗生素，添加β-內(nèi)酰胺酶（即青霉素酶）；對(duì)于頭孢類抗生素，則添加頭孢菌素酶。

而API的消除，則主要依據(jù)：“中國(guó)藥典”2010年版 附錄109頁  附錄XI J 表1：“常見干擾物中和劑或滅活方法”  中所對(duì)應(yīng)的中和或滅活方法，還有一個(gè)方法就是借鑒相關(guān)產(chǎn)品微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證中所采取的中和或滅活方法來消除API的影響。

2、消毒劑殘留

制藥企業(yè)潔凈環(huán)境每天都在使用消毒劑，怎樣確定殘留的消毒劑沒有影響微生物的生長(zhǎng)？選擇什么樣的培養(yǎng)基可以限度的衡量潔凈室表面的微生物水平？理論知識(shí)告訴我們，卵磷脂、吐溫-80組合后能夠消除季胺類化合物（苯扎溴銨、苯扎氯銨等）消毒劑的影響；卵磷脂、吐溫-80和L-組氨酸組合后能夠消除醛類（甲醛、戊二銓等）和酚類（苯酚、間苯二酚等）消毒劑的影響；硫代硫酸鈉能夠消除鹵素類消毒劑（碘伏、碘酒等）的影響等等。

現(xiàn)在，國(guó)外制藥企業(yè)環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)時(shí)，用于潔凈室表面取樣的培養(yǎng)基大多為大豆酪蛋白+卵磷脂+吐溫-80瓊脂培養(yǎng)基（即TSAWLP）。選擇這樣的培養(yǎng)基就可以有效的降解可能殘留在潔凈室表面的消毒劑（主要是季胺類化合物消毒劑）的殘留。

二、取樣平板的無菌性

《中國(guó)藥典》2010年版中對(duì)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基平板有明確的要求。用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。由此可見，在法規(guī)層面，對(duì)于制藥企業(yè)潔凈室環(huán)境中微生物測(cè)試的培養(yǎng)基提出了嚴(yán)格要求。要求在潔凈室取樣時(shí)采用無菌的預(yù)制培養(yǎng)基平板（即Ready to- use Culture Media Plate）取樣。

 事實(shí)上，國(guó)外眾多的制藥企業(yè)用于潔凈環(huán)境測(cè)試的培養(yǎng)基平板，包括浮游菌、沉降菌取樣的90mm普通平板和表面取樣的55mm接觸平板都是無菌的預(yù)制平板培養(yǎng)基。《中國(guó)藥典》2010年版中對(duì)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基的要求就是出自USP 〈1117〉MICROBIOLOGICAL BESTLABORATORY PRACTICES  章節(jié)。

 對(duì)比中國(guó)藥典和USP兩部藥典在環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的具體要求，USP還特別強(qiáng)調(diào)了預(yù)培養(yǎng)之后必須要進(jìn)行的促生長(zhǎng)試驗(yàn)（即Growth Promotion Testing），這里也凸顯了USP在強(qiáng)調(diào)避免微生物測(cè)試結(jié)果“假陽性”的同時(shí)，更加關(guān)注的是微生物測(cè)試結(jié)果的“假陰性”?，F(xiàn)代微生物檢測(cè)領(lǐng)域，“假陰性”遠(yuǎn)比“假陽性”要可怕，制藥企業(yè)潔凈環(huán)境中微生物的檢測(cè)，使用無菌預(yù)制平板培養(yǎng)基，不僅杜絕了測(cè)試結(jié)果的“假陽性”，同時(shí)也消除了“假陰性”的可能。也符合了中國(guó)GMP2010中大力提倡的風(fēng)險(xiǎn)管理的理念。

三、制藥企業(yè)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)的解決方案

針對(duì)制藥企業(yè)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)中忽視的問題，在設(shè)計(jì)一個(gè)潔凈室的微生物監(jiān)測(cè)方案時(shí)，應(yīng)該著力避免這兩個(gè)問題。在培養(yǎng)基中添加β-內(nèi)酰胺酶或頭孢菌素酶是一定要做驗(yàn)證的，就是要驗(yàn)證所添加酶或中和劑的種類和劑量能夠降解掉環(huán)境中的抑菌因素，從而真實(shí)還原本企業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中可能存在的微生物的真實(shí)水平。避免環(huán)境監(jiān)測(cè)微生物“假陽性”或“假陰性”結(jié)果，另一行之有效方法就是采用無菌預(yù)制培養(yǎng)基平板（Ready to- use Culture Media Plate）取樣。

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