在臨床診斷與生命科學(xué)研究領(lǐng)域，乳酸脫氫酶（LDH）檢測是一項具有價值的指標(biāo)。精準(zhǔn)規(guī)范的檢測操作流程，是獲取可靠檢測數(shù)據(jù)的關(guān)鍵前提。

樣本采集與前處理規(guī)范

血液是 LDH 檢測常見樣本類型。采集時，需采用干燥、無添加劑的專用采血管，采血量一般控制在 3 - 5ml。采血后，應(yīng)輕輕顛倒采血管 8 - 10 次，確保血液與抗凝劑充分混勻，防止血液凝固。對于血清樣本，需在室溫下靜置 30 分鐘，待血液凝固后再進(jìn)行離心。離心轉(zhuǎn)速設(shè)置為 3000rpm，持續(xù)離心 10 分鐘，此參數(shù)是經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證得出的條件，既能有效分離出血清，又可避免細(xì)胞破損釋放過多 LDH 造成檢測結(jié)果偏高。離心后的血清應(yīng)盡快進(jìn)行檢測，若不能及時檢測，需放置于 2 - 8℃冰箱中保存，但保存時間不宜超過 24 小時。

試劑準(zhǔn)備與加樣要點(diǎn)

LDH 檢測試劑盒在使用前需提前 30 分鐘從冰箱取出，放置至室溫平衡。試劑平衡至室溫的過程，猶如喚醒沉睡的檢測系統(tǒng)，各組分活性逐漸恢復(fù)至最佳狀態(tài)。加樣時，移液器需精準(zhǔn)校準(zhǔn)，誤差控制在 ±2% 以內(nèi)。吸取樣本時，移液器槍頭應(yīng)垂直插入樣本液面下 2 - 3mm 處，避免產(chǎn)生氣泡。加樣量根據(jù)試劑盒說明書要求，一般在 20 - 50μl 之間。加樣動作需輕柔而準(zhǔn)確，加樣后輕輕晃動反應(yīng)板，使樣本與試劑充分混合，但晃動幅度不宜過大，以防液體濺出。

酶反應(yīng)啟動與孵育條件控制

當(dāng)樣本與試劑混合均勻后，酶反應(yīng)即刻啟動。LDH 在催化反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，將乳酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸，同時伴隨著 NAD+ 還原為 NADH。這個過程對溫度極為敏感，37℃是最適反應(yīng)溫度。實(shí)驗(yàn)室常用水浴孵箱或酶標(biāo)儀自帶孵育功能進(jìn)行溫控。孵育時間一般設(shè)定為 15 - 30 分鐘，時間過短，反應(yīng)不充分，吸光度值偏低；時間過長，可能導(dǎo)致反應(yīng)體系中底物耗盡，酶活性下降，同樣影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。

信號讀取與結(jié)果分析要點(diǎn)

孵育完成后，使用酶標(biāo)儀在 340nm 波長下讀取吸光度值。340nm 是 NADH 特征吸收峰，吸光度值與樣本中 LDH 活性呈正相關(guān)。讀取時，酶標(biāo)儀需預(yù)熱 30 分鐘，光路系統(tǒng)需保持清潔，避免灰塵或液體殘留干擾光信號傳輸。結(jié)果分析時，依據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程進(jìn)行計算。標(biāo)準(zhǔn)曲線需定期重新繪制，以驗(yàn)證試劑盒性能穩(wěn)定性。若檢測結(jié)果超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，需對樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后重新檢測。

質(zhì)控品同步檢測與結(jié)果評估

每次檢測都應(yīng)同步檢測低、中、高三個濃度的質(zhì)控品。質(zhì)控品猶如檢測系統(tǒng)的 “標(biāo)尺”，其結(jié)果可反映整個檢測流程的準(zhǔn)確性與精密度。低濃度質(zhì)控品結(jié)果波動范圍應(yīng)控制在 ±10% 以內(nèi)，中、高濃度控制在 ±8% 以內(nèi)。若質(zhì)控結(jié)果偏離此范圍，需立即排查問題，可能是試劑配制錯誤、儀器校準(zhǔn)偏差或操作步驟失誤等。只有質(zhì)控合格的檢測結(jié)果，才具有臨床參考價值。