（1）滴水破開法

首先將凍干粉甩至底部圓球位置，然后用70%的酒精脫脂棉球擦凈凍干管，將凍干管的尖-端（注意不是圓球端）放在火焰上加熱。然后迅速滴幾滴無菌水至加熱處，此時凍干管的尖-端會自動破開。最后用鑷子輕輕敲下凍干管尖-端，并將凍干管開口處在火焰上加熱滅菌一下，并且保持下面的菌種菌種活化步驟在火焰旁操作。然后逐漸敲開凍干管，直至適當位置。（敲開位置以可以很好注入無菌水以及吸取混勻后的液體為準）

(1)酒精燈上加熱

(2)滴加冷的無菌水，菌種管自動裂開

(3)鑷子掰開

(4) 加入無菌水混勻菌粉，然后全部

（2）直接敲開法

首先將凍干粉甩至底部圓球位置，然后用70%的酒精脫脂棉球擦凈凍干管，將凍干管的尖-端（注意不是圓球端）放在火焰稍微加熱滅菌。然后直接用大鑷子敲打尖-端，敲開后將破口處在火焰上加熱滅菌一下，并且保持下面的菌種菌種活化步驟在火焰旁操作。 然后逐漸敲開凍干管，直至適當位置。（敲開位置以可以很好注入無菌水以及吸取混勻后的液體為準）。

1)直接用鑷子敲開

(2)加入無菌水混勻菌粉，然后全部接種至培養(yǎng)基上

菌種復蘇中注意事項：

（1）菌種活化前，如要長期保藏，可將凍干管放在4-10度條件下保存。

（2）此凍干菌是經(jīng)凍干燥并抽真空保存的，開啟后必須一次使用完，不能剩菌粉下次使用。

（3）凍干管中大部分是用牛奶做保護劑，菌體為少數(shù)，復蘇時要全部菌懸液接種在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復蘇不成功。

（4）凍干粉是在凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時延滯期較長，如在說明書建議的培養(yǎng)時間還未長出，請繼續(xù)在相應的環(huán)境下多培養(yǎng)24小時或更長時間，直至菌種培養(yǎng)出。

（5）正常情況下，菌種是需要培養(yǎng)2代后才會具備穩(wěn)定的活性，所以建議做2次繼代培養(yǎng)后才能用于您后續(xù)的實驗。

（6）打開凍干管應在專業(yè)的微生物專業(yè)人員才可操作，注意生物危害程度為三級的菌種應在生物安全柜中操作。其中標準菌種可以在超凈臺中操作，并且做好個人防護。開管時要注意做好個人面部防護，防止碎片飛入眼中。

（7）以上開管操作都應該在安全柜或超凈臺中操作，并且操作完后所有器皿都要經(jīng)滅菌后再銷毀。