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FACS分析檢測(cè)跨膜型腫瘤壞死因子(TNF)

來(lái)源:上海源葉生物科技有限公司   2012年07月07日 11:32  

以下簡(jiǎn)單介紹用FACS分析檢測(cè)跨膜型TNF。

1.材料
①含2%人血清,0.1%疊氮鈉的PBS;
②FITC標(biāo)記的TNF單克隆抗體;
③羊或兔抗TNF多克隆抗體及F1TC標(biāo)記的羊抗兔IzC。

2.操作步驟
(1)單核細(xì)胞加或不加激活劑,37℃培養(yǎng)一定時(shí)間。
(2)2000rpm離心10min,棄上清。
(3)用含2%人血清/0.1%疊氮鈉的PBS懸浮細(xì)胞。
(4)將105細(xì)胞廳L0口人圓底96孔培養(yǎng)板,并加FITC標(biāo)記的TNF單抗冰上放置20min。如無(wú)FITC標(biāo)記的TNF單抗,可按(5)~(7)步驟操作。
(5)加1:500稀釋的兔抗TNF多抗,冰上放置20min。
(6)用PBS洗一次,以去除未結(jié)合的抗體。
(7)再加1:500稀釋的FITC標(biāo)記的羊抗兔ISC,置冰上20min。
(8)PBS洗4次后,用流式細(xì)胞儀分析熒光標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞百分率及平均熒光強(qiáng)度。

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