雖然我們都認(rèn)為，唯有天才方能造出偉大的作品，但今天我想說(shuō)，無(wú)名的工人同樣能夠制造出毫不遜色的杰作。
工作原理
利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的葡聚糖凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來(lái)進(jìn)行分離。層析時(shí)，大于凝膠孔徑的大分子，被阻于凝膠相外，沿著凝膠顆粒之間的間隙走，下移速度最快，故最先洗脫下來(lái)，中分子物質(zhì)部分進(jìn)入凝膠內(nèi)部，洗脫速度為其次，而小分子物質(zhì)因全部進(jìn)入凝膠，受到阻力最大，故最后被洗脫下來(lái)，如此物質(zhì)得到分離。
技術(shù)參數(shù)
特點(diǎn)
1.分辨率高，流速適中，易收集，耐酸耐堿耐高溫，具有良好的穩(wěn)定性；
2.一般生物大分子的分子量比鹽等小分子大許多倍，用凝膠過(guò)濾方法為生物產(chǎn)品脫鹽十分簡(jiǎn)單、可靠。
應(yīng)用
用于純化分子量大于5,000 Da的蛋白質(zhì)分子或替換成所需的緩沖液。
操作步驟
1.平衡：打開(kāi)上下蓋帽，柱里的保護(hù)液自然滴落，繼續(xù)加入緩沖溶液，邊滴邊加，至少加3倍柱體積用來(lái)清除層析柱中的保護(hù)液。
2.進(jìn)樣：BC-10脫鹽柱的最大進(jìn)樣體積為2mL，樣品體積不足時(shí)，可以在樣品*進(jìn)入柱床體積后添加緩沖液到總體積2mL。為了增長(zhǎng)填料的使用壽命，所用的樣品推薦使用0.45微米的濾膜過(guò)濾。
3.洗脫：繼續(xù)加入緩沖液進(jìn)行洗脫。
再生保存步驟
——該層析柱雖是一次性使用，但是也可以重復(fù)再生使用。
1．去離子水洗5個(gè)柱體積；
2．0.5M氫氧化鈉清洗2-3柱體積；
3．去離子水清洗3個(gè)柱體積；
4．再用20%乙醇洗柱5個(gè)柱體積。
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