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過氧化物酶(POD)測試盒說明書

來源:上海哈靈生物科技有限公司   2024年11月21日 13:37  

一、測定原理:上海哈靈生物科技有限公司生產(chǎn)的過氧化物酶(POD)測試盒利用過氧化物酶(POD)催化過氧化氫反應(yīng)的原理,通過測定420nm處吸光度的變化得出其酶活性。

二、試劑的組成和配制:(試劑盒有效期6個月)

  • 試劑一:60mL液體×4瓶,4℃保存。

  • 試劑二:粉劑×3瓶,4℃保存。

    • 試劑二應(yīng)用液的配制:臨用每瓶粉劑加入10mL的雙蒸水溶解,4℃避光保存。(顏色變深以后棄用)

  • 試劑三:5mL液體×1瓶,4℃保存。

    • 試劑三應(yīng)用液的配制:臨用前用蒸餾水15~30倍稀釋,使得在1cm光徑、波長240nm下,蒸餾水調(diào)零時,試劑三應(yīng)用液的吸光值保持在0.4左右,現(xiàn)用現(xiàn)配。若吸光值太高,則加蒸餾水稀釋;若吸光值太低,則加入適量試劑三。(一般在25倍左右稀釋)

  • 試劑四:50mL液體×2瓶,4℃保存。

三、所需儀器及試劑:上海哈靈生物科技有限公司推薦使用可調(diào)420nm波長的可見光分光光度計及1cm石英光徑比色皿,以及可調(diào)240nm波長的紫外光分光光度計,渦旋混合器,離心機(jī),37℃水浴鍋,秒表,蒸餾水,生理鹽水等儀器和試劑

四、操作步驟:

  1. 前處理:

    • 植物組織勻漿的制備:準(zhǔn)確稱取植物組織重量,按照重量(g):體積(mL)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦使用生理鹽水(0.86%或0.9%的NaCl水溶液)或磷酸鹽緩沖液︰0.1mol /L pH7~7.4),冰水浴條件下制備成10%的組織勻漿液,3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后,取上清液進(jìn)行測定。

  2. 操作表:

    • 測定管 對照管

    • 試劑一 (mL) 2.4 2.4

    • 試劑二應(yīng)用液(mL) 0.3 0.3

    • 試劑三應(yīng)用液(mL) 0.2

    • 雙蒸水(mL) 0.2

    • 樣本(mL) 0.1 0.1

    • 37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘

    • 試劑四(mL) 1.0 1.0

    • 混勻后,3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取上清于420nm處,1cm光徑,雙蒸水調(diào)零,測定OD


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