DNA甲基化實驗

一、DNA甲基化介紹

　　DNA甲基化是指生物體在DNA甲基轉移酶（DNA methyl-transferase,Dnmts）的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應。DNA甲基化通常抑制基因表達，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達，這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現(xiàn)對基因表達的調(diào)控。

二、DNA甲基化檢測方法

　　1、甲基化特異性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）

　　用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變；隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物，如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化；反之，說明被檢測的位點不存在甲基化。

　　2、亞硫酸氫鹽測序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）

　　用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR，在擴增過程中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶，最后將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進行測序，就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化，這種方法稱為BSP-克隆測序法。

三．實驗結果展示

MSP：

M:2000maker:2000bp:1000bp:750bp:500bp:250bp:100bp

1:5CA-M

2: 5CA-U

3:12CA-M

4:12CA-U

5:26CA-M

6:26CA-U

BSP：

四、送樣運輸要求：

　　動物組織：新鮮的組織量100 mg(黃豆大小)，最少50 mg（綠豆大小），干冰運輸。

　　細胞：1×10^6個細胞，收集細胞沉淀，干冰運輸。

　　全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管，-20度運輸。