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shRNA載體構建
技術原理
首先設計根據(jù)需求設計shRNA引物一套，完成引物退火。將載體進行雙酶切反應，雙酶切后割膠回收。將shRNA和雙酶切回收后的載體，使用試劑盒進行重組成環(huán)狀片段，轉入制備好的細菌感受態(tài)細胞，對長出的單克隆菌落送測序公司進行測序鑒定，比對正確的克隆即為構建成功的shRNA表達載體。
shRNA的靶點選擇決定著對靶向基因的表達敲低效果，通常涉及3-4個shRNA靶點同時進行實驗，根據(jù)后續(xù)檢測結果確定最佳靶點后，安排后續(xù)實驗。
實驗方法
體內抑制效果強：
shRNA表達載體生物體內的抑制效果強于普通合成的siRNA，且能與組織特異性定位啟動子協(xié)同作用。
誘導表達功能：
科研人員可以通過shRNA表達載體服務建立可誘導表達系統(tǒng)，控制siRNA的表達。
轉染細胞易富集：
載體上可附加抗生素抗性，篩除未轉染的細胞，輕松富集有沉默潛力的細胞。
干擾效果長期有效：
shRNA表達載體能幫助研究人員獲得穩(wěn)定細胞系，并保證RNA干擾的長期性。
實驗操作簡便：
shRNA表達載體將以質粒的形式寄給客戶，這種形式比一般合成的siRNA更加穩(wěn)定，操作也更加簡單。同時，由于載體可重復操作，客戶使用更加方便。
優(yōu)惠的價格：
shRNA表達載體的可重復操作性降低了其高通量應用的價格，滿足了siRNA客戶的大量需求。
可用于基因治療：
構建在病毒載體上的shRNA能被應用于感染基因治療核心細胞系。
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