手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
RAW 264.7-LUC 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病的培養(yǎng)與鑒定方法
RAW 264.7-LUC是一種常用的小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞系，廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、藥理學(xué)和腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的研究。該細(xì)胞系具有較高的增殖能力和穩(wěn)定的遺傳特性，是研究巨噬細(xì)胞功能和藥物篩選的理想模型。本文將詳細(xì)介紹RAW 264.7-LUC細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定方法。
一、細(xì)胞培養(yǎng)
培養(yǎng)基的選擇：
RAW 264.7-LUC細(xì)胞通常在DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培養(yǎng)基中生長。培養(yǎng)基中需添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素-鏈霉素溶液，以提供必要的營養(yǎng)和防止細(xì)菌污染。
細(xì)胞傳代：
細(xì)胞傳代是維持細(xì)胞生長的重要步驟。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時，需進行傳代。首先，棄去舊培養(yǎng)基，用PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌細(xì)胞一次，然后加入適量的胰蛋白酶溶液，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離瓶壁。待細(xì)胞懸浮后，加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)條件：
RAW 264.7-LUC細(xì)胞應(yīng)在37°C、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。CO2濃度的維持有助于穩(wěn)定培養(yǎng)基的pH值，促進細(xì)胞生長。
二、細(xì)胞鑒定
顯微鏡觀察：
使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和生長狀態(tài)。健康的細(xì)胞呈圓形或不規(guī)則形狀，細(xì)胞質(zhì)豐富，胞核清晰可見。若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓、浮起或出現(xiàn)大量碎片，則可能表明細(xì)胞狀態(tài)不佳或受到污染。
細(xì)胞活力測定：
細(xì)胞活力測定是評估細(xì)胞健康狀況的重要方法。常用的測定方法包括MTT法和Trypan Blue染色法。MTT法通過檢測細(xì)胞內(nèi)線粒體的還原能力來評估細(xì)胞活力；Trypan Blue染色法則通過染色死細(xì)胞，計算活細(xì)胞比例。
流式細(xì)胞術(shù)分析：
流式細(xì)胞術(shù)是一種高通量的細(xì)胞分析技術(shù)，可用于檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物、細(xì)胞周期和凋亡等。通過對細(xì)胞進行熒光染色，結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測，可以獲取詳細(xì)的細(xì)胞信息。
基因表達(dá)分析：
通過實時熒光定量PCR(qRT-PCR)或Western Blot等方法，檢測細(xì)胞中特定基因的表達(dá)水平，進一步確認(rèn)細(xì)胞的特性和功能狀態(tài)。
三、注意事項
無菌操作：
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免細(xì)菌和真菌污染。所有操作應(yīng)在超凈工作臺中進行，操作前需用75%酒精對手和器具進行消毒。
試劑質(zhì)量：
細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑和耗材應(yīng)為高質(zhì)量的生物制品，避免因試劑質(zhì)量問題影響細(xì)胞生長和實驗結(jié)果。
定期檢測：
定期檢測細(xì)胞生長狀態(tài)和活力，及時發(fā)現(xiàn)并處理問題。建議每兩周進行一次Mycoplasma檢測，以防支原體污染。
RAW 264.7-LUC細(xì)胞作為一種重要的實驗?zāi)Ｐ?，其培養(yǎng)與鑒定方法的掌握對于相關(guān)領(lǐng)域的研究具有重要意義。通過合理的培養(yǎng)條件和嚴(yán)格的鑒定方法，可以確保細(xì)胞的穩(wěn)定生長和實驗結(jié)果的可靠性。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心