海藻糖酶（THL）試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1163

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

THL（EC 3.2.1.28）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應(yīng)。

采用3.5－二硝基水楊酸法測(cè)定THL催化海藻糖產(chǎn)生的還原糖的含量。還原糖與3.5－二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比，由此判斷THL活性的高低。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶 ，4℃保存，用時(shí)加入2mL試劑一，充分溶解待用；

試劑三：液體13mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：液體13mL×1 瓶，常溫保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，4℃保存，含10mg無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入1ml蒸餾水溶解備用，4℃可保存1周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長(zhǎng)時(shí)間。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備： 

1、細(xì)菌或細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液充分勻漿以破碎并裂解細(xì)胞（功率20％，超聲3S秒，間隔10S，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。8000g ，4℃下離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）的處理：吸取約0.1mL血清（漿），加入1mL提取液，冰浴中勻漿。8000g ，4℃下離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，100℃煮沸5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測(cè)定540nm處測(cè)定管吸光值。計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管均需設(shè)立一個(gè)對(duì)照管。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管濃度和吸光度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，x為吸光度，y為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）。

三、THL活力計(jì)算：

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力（U /mg prot）＝1000× y÷÷T÷Cpr =100× y ÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力（U /g 鮮重）＝1000×y÷T÷(W÷V樣總)=100 ×y÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL 活力（U /10⁴ cell）＝1000×y÷T÷(500÷V樣總)=0.2 ×y

4、按血清（漿）體積計(jì)算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL 活力(U/mL)=1000×y÷T÷(V樣÷V樣總)=1000×y。

1000：1mg/mL=1000µg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10min；V樣：加入血清（漿體積），0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。

海藻糖酶（THL）試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1163

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

THL（EC 3.2.1.28）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應(yīng)。

采用3.5－二硝基水楊酸法測(cè)定THL催化海藻糖產(chǎn)生的還原糖的含量。還原糖與3.5－二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比，由此判斷THL活性的高低。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶 ，4℃保存，用時(shí)加入2mL試劑一，充分溶解待用；

試劑三：液體13mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：液體13mL×1 瓶，常溫保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，4℃保存，含10mg無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入1ml蒸餾水溶解備用，4℃可保存1周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長(zhǎng)時(shí)間。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備： 

1、細(xì)菌或細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液充分勻漿以破碎并裂解細(xì)胞（功率20％，超聲3S秒，間隔10S，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。8000g ，4℃下離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）的處理：吸取約0.1mL血清（漿），加入1mL提取液，冰浴中勻漿。8000g ，4℃下離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，100℃煮沸5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測(cè)定540nm處測(cè)定管吸光值。計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管均需設(shè)立一個(gè)對(duì)照管。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管濃度和吸光度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，x為吸光度，y為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）。

三、THL活力計(jì)算：

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力（U /mg prot）＝1000× y÷÷T÷Cpr =100× y ÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力（U /g 鮮重）＝1000×y÷T÷(W÷V樣總)=100 ×y÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL 活力（U /10⁴ cell）＝1000×y÷T÷(500÷V樣總)=0.2 ×y

4、按血清（漿）體積計(jì)算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL 活力(U/mL)=1000×y÷T÷(V樣÷V樣總)=1000×y。

1000：1mg/mL=1000µg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10min；V樣：加入血清（漿體積），0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。