淀粉分支酶（SBE）活性檢測試劑盒（可見分光光度法）

產(chǎn)品貨號：BA1083

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣

產(chǎn)品說明：

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測定SBE活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。

淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收，SBE可切斷支鏈淀粉側(cè)支，從而降低了淀粉-碘復合物在660nm吸收值，一定時間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

產(chǎn)品內(nèi)容： 

溶液的配制：

試劑二：臨用前加入1mL蒸餾水，緩慢加熱，逐漸升溫至沸騰，使其充分溶解，備用。

技術(shù)指標： 

檢出限：0.0074mg/mL

線性范圍：0.008-0.7mg/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品： 

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

操作步驟： 

一、樣本處理理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。15000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟

1. 可見分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測定：

混勻，室溫靜置10min，用蒸餾水調(diào)零，660nm處讀取各管吸光值。

注意：若有樣本渾濁，建議離心后取上清測定。

三、SBE活力單位計算

1. 按照蛋白濃度計算

單位的定義：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在1mL反應體系中每分鐘降低1%碘藍值為一個酶活性單位。

SBE活性(U/mg prot) =（A對照管-A測定管）÷A對照管×100%÷1%÷（Cpr×V樣本）×V反應÷T =24×（A對照管-A測定管）÷A對照管÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

單位的定義：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每g組織在1mL反應體系中每分鐘降低1%碘藍值為一個酶活性單位。

SBE 活性(U/g質(zhì)量) =（A對照管-A測定管）÷A對照管×100%÷1%÷（W÷V提取×V樣本）×V反應÷T =（A對照管-A測定管）÷A對照管÷W×24

V樣本：加入樣本體積，0.25mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量， g；V反應：反應體系體積，1.2mL；T：反應時間，20min。

注意事項：

1. 可以在不同對照管中加入不同的樣本，然后集中進行1min沸水浴處理。

2. 試劑一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。