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單細(xì)胞柔性分選系統(tǒng)結(jié)合CRISPR Cas9技術(shù)新應(yīng)用
近期，一篇文章報(bào)道了巨噬樣細(xì)胞的SAMHD1基因編輯最新進(jìn)展，揭示了SAMHD1磷酸化調(diào)控、HIV-1限制和細(xì)胞dNTP水平之間的復(fù)雜關(guān)系。
作者報(bào)道了BLaER1細(xì)胞作為一種新的人類(lèi)巨噬樣細(xì)胞HIV-1感染模型結(jié)合CRISPR/Cas9敲入(KI)技術(shù)將特異性突變引入 SAMHD1位點(diǎn)以研究生理背景下的突變。轉(zhuǎn)分化的BLaER1細(xì)胞含有活性去磷酸化的SAMHD1，可阻斷HIV-1報(bào)告病毒的感染。正如預(yù)期的那樣，純合子T592E突變，而不是T592A，緩解了HIV-1逆轉(zhuǎn)錄的阻滯。將VLP-Vpx共同遞送到SAMHD1 T592E KI 突變細(xì)胞中并沒(méi)有進(jìn)一步增強(qiáng)HIV-1感染，這表明缺乏獨(dú)立于T592去磷酸化的SAMHD1介導(dǎo)的額外抗病毒活性。T592E KI細(xì)胞保留的dNTP水平與WT細(xì)胞相似，表明SAMHD1的抗病毒和dNTP酶活性解耦。SAMHD1中催化位點(diǎn)的完整性對(duì)于抗病毒活性至關(guān)重要，然而在攜帶催化核心突變的細(xì)胞中觀察到HIV-1 限制與整體細(xì)胞dNTP水平的低相關(guān)性?？傊?，強(qiáng)調(diào)HIV-1限制，SAMHD1酶功能和T592磷酸化調(diào)節(jié)之間關(guān)系的復(fù)雜性，為內(nèi)源性和生理背景下的研究提供了新的工具。
圖3. CRISPR/Cas9敲入產(chǎn)生SAMHD1突變體的流程
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