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ACK紅細胞裂解液的原理及使用

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2024年05月14日 09:18  

原理:氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應(yīng)物質(zhì),氨根離子不能通過細胞膜,而其他離子可以通過,造成細胞內(nèi)外的離子濃度差異,形成了滲透壓差,外部的水分會擴散至細胞內(nèi),使紅細胞膨脹,達到裂解的效果。


使用說明:
組織細胞樣品:
1.新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液,離心棄去上清液;
2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液),輕輕吹打混勻;
3.800-1000rpm離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;
5.如裂解不好可重復(fù)步驟2和3;
6.重懸細胞,用于后續(xù)實驗;如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液中進行。


血細胞:
1.新鮮抗凝血,離心棄去上清液;
2.取出4℃冰箱預(yù)冷的ELS裂解液,按1:6-10的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液),輕輕吹打混勻;
3.800-1000rpm離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;
5.如裂解不可重復(fù)步驟2和3;
6.重懸細胞,用于后續(xù)實驗;如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進行。


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