雞外周血NK細(xì)胞的組織塊直接培養(yǎng)法

來源：上海一研生物科技有限公司 2024年02月28日 17:12

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)

【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺中有以下物品：

1、50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶

2、100ml滅菌燒杯2個(gè)

3、50ml離心筒2個(gè)

4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)

5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把

8、酒精燈1臺

步驟：

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉鼠、小鼠和大鼠)。

2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。

3)在無菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。

4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。

5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入lml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。

6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5。

7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。

8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心。

9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。

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