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類器官技術(shù)攻克新領(lǐng)域丨逸漠生物iPSC誘導(dǎo)內(nèi)耳類器官

來源：廈門逸漠生物科技有限公司 2024年01月24日 18:16

前言

內(nèi)耳是聽力系統(tǒng)的重要組成部分，負(fù)責(zé)感知聽力和平衡功能，一旦損傷將會造成不可逆的危害。人多能干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化為內(nèi)耳類器官，在內(nèi)耳模擬發(fā)育、基因治療、建立疾病模型和藥物篩選方面發(fā)揮重要作用，有利于對內(nèi)耳發(fā)育和生理學(xué)的了解，能迅速推進(jìn)對內(nèi)耳相關(guān)疾病的治療。

逸漠生物研制的Advanced-diff系列內(nèi)耳類器官試劑盒能在體外短時間內(nèi)誘導(dǎo)生成類器官，并且讓成熟的內(nèi)耳類器官具有神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞環(huán)繞，大大縮短內(nèi)耳類器官的培養(yǎng)時間，加速研究效率，推進(jìn)對內(nèi)耳類器官的探索。

Advanced-diff系列內(nèi)耳類器官試劑盒是專用于誘導(dǎo)人多能干細(xì)胞分化為內(nèi)耳類器官的培養(yǎng)試劑盒，包含了適合Advanced-diff系列內(nèi)耳類器官生長的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、成熟培養(yǎng)基及誘導(dǎo)細(xì)胞分化所需的添加物，即買即用，不含動物源成分。

產(chǎn)品相關(guān)信息

產(chǎn)品優(yōu)勢

無動物源成分，操作簡單，使用方便，誘導(dǎo)的內(nèi)耳類器官能產(chǎn)生耳泡結(jié)構(gòu)，在60天左右可觀察到感覺毛細(xì)胞生成。

操作流程

分化第-2天

當(dāng)人多能干細(xì)胞匯合度達(dá)到75%-80%左右開始誘導(dǎo)分化為內(nèi)耳類器官，分化第-2天使用EB形成培養(yǎng)基誘導(dǎo)EB形成。分化第-1天，每孔加入100 μL EB形成培養(yǎng)基，使每孔體積為200 μL。

分化第0天

吸棄培養(yǎng)基，加入100 μL/孔基礎(chǔ)培養(yǎng)基1+補(bǔ)充劑A誘導(dǎo)EB分化，用排槍輕輕吹打，使EB懸浮。在37℃CO2，5%培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天。

分化第4天

基礎(chǔ)培養(yǎng)基1+補(bǔ)充劑B混合均勻，按每孔25μl，加到96孔板中，并輕輕移液8-10次混勻，使每孔培養(yǎng)基的終體積為125μl，將96孔板放回培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2孵育4天。

分化第8天

基礎(chǔ)培養(yǎng)基1+補(bǔ)充劑C混合均勻，按每孔25 μL，加到96孔板中，并輕輕移液8-10次混勻，使每孔培養(yǎng)基的終體積為150 μL，將96孔板放回培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2孵育4天。

分化第12天

EB誘導(dǎo)結(jié)束，準(zhǔn)備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基2（提前在冰上冷藏至少30min）；或者，在d11上使基礎(chǔ)培養(yǎng)基2存儲在4°C過夜。Matrigel提前與4℃解凍，然后加入冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基2中，反復(fù)吹打溶解Matrigel，然后再培養(yǎng)基和Matrigel混合溶液中加入補(bǔ)充劑D，混合均勻，加熱到rt。將96孔板中的聚集物轉(zhuǎn)移到100mm培養(yǎng)皿中，用1-2mL的DPBS洗滌聚集體2次，再用1mL的混合培養(yǎng)基洗滌1次，然后加入10ml混合培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中，37℃，5%CO2 孵育3天；D15吸掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，重新加入不含Matrigel的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育3天，誘導(dǎo)耳泡形成。

分化第18-60天

內(nèi)耳類器官逐漸成熟，將培養(yǎng)基換成成熟培養(yǎng)基，開始長期培養(yǎng)，每5天換一次液，到60天左右獲得具有感覺毛細(xì)胞的成熟內(nèi)耳類器官。

鑒定

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