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DNA退火緩沖液(5×)產(chǎn)品說明書

來源:上海尚寶生物科技有限公司   2024年01月22日 11:05  

DNA退火緩沖液(5×)

產(chǎn)品貨號(hào):R21943

產(chǎn)品包裝:1ml/5ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing Buffer for DNA Oligos)簡(jiǎn)稱為DNA退火緩沖液,是一種可用于DNA oligo退火的緩沖液,可用于常規(guī)的DNA oligo的退火,尤其適合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo的退火。由于RNAi質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo通常由于含有約20個(gè)左右的互補(bǔ)序列,自身易形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),從而影響兩條DNA oligo的正確退火。

尚寶生物 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),并且兩條oligo退火后可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接,轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽性克隆。該本試劑操作簡(jiǎn)單,只需把待退火的DNA oligoAnnealing Buffer for DNAOligos(5×)按照一定比例混合后,置于PCR儀上進(jìn)行程序降溫,約90min即可完成。

產(chǎn)品組成:    

試劑名稱

規(guī)格

保存溫度

試劑(A): Annealing Buffer for DNAOligos(5×)

1ml

-20℃

試劑(B): Nuclease-Free Water

5ml

室溫

操作步驟(僅供參考)

1. 把待退火的DNA oligo 用經(jīng)滅菌的超純水或 Nuclease-Free Water 配制成 50μM,同

時(shí)溶解 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×),混勻備用。

2. 按如下退火反應(yīng)體系操作:

Nuclease-Free Water

Tatal4

Annealing Buffer for DNA

0μl

Oligos(5×)

20μl

DNA oligo A(50μM)

20μl

DNA oligo B(50μM)

20μl

按照上述順序,依次加入并混勻,如果所用 PCR 儀沒有加熱蓋,可加入 Mineral Oil 防止

液體揮發(fā)。

3. 按如下 PCR 儀的退火條件:

步驟

溫度

時(shí)間

作用

1

95℃

2min

Oligo充分變性

2

90s下降1℃,降至25℃

90min

程序退火

3

4℃

長(zhǎng)期保存

暫時(shí)存放

4. 退火后可直接用于連接反應(yīng),也可以-20℃凍存?zhèn)溆?。如果退火結(jié)束后打算進(jìn)行酶切等

其它反應(yīng),最好用純化試劑盒進(jìn)行純化,或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過 5%

以避免 Annealing Buffer 對(duì)后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。

注意事項(xiàng):

1. 避免反復(fù)凍融,以免效率下降。

2. 該試劑只適合于DNA oligo的退火,不適用于RNA oligo的退火。

3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件:

-20℃,12個(gè)月有效。



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