DNA退火緩沖液(5×)
產(chǎn)品貨號(hào):R21943
產(chǎn)品包裝:1ml/5ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing Buffer for DNA Oligos)簡(jiǎn)稱為DNA退火緩沖液,是一種可用于DNA oligo退火的緩沖液,可用于常規(guī)的DNA oligo的退火,尤其適合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo的退火。由于RNAi質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo通常由于含有約20個(gè)左右的互補(bǔ)序列,自身易形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),從而影響兩條DNA oligo的正確退火。
尚寶生物 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),并且兩條oligo退火后可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接,轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽性克隆。該本試劑操作簡(jiǎn)單,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNAOligos(5×)按照一定比例混合后,置于PCR儀上進(jìn)行程序降溫,約90min即可完成。
產(chǎn)品組成:
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存溫度 |
試劑(A): Annealing Buffer for DNAOligos(5×) | 1ml | -20℃ |
試劑(B): Nuclease-Free Water | 5ml | 室溫 |
操作步驟(僅供參考):
1. 把待退火的DNA oligo 用經(jīng)滅菌的超純水或 Nuclease-Free Water 配制成 50μM,同
時(shí)溶解 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×),混勻備用。
2. 按如下退火反應(yīng)體系操作:
Nuclease-Free Water | Tatal4 |
Annealing Buffer for DNA | 0μl |
Oligos(5×) | 20μl |
DNA oligo A(50μM) | 20μl |
DNA oligo B(50μM) | 20μl |
按照上述順序,依次加入并混勻,如果所用 PCR 儀沒有加熱蓋,可加入 Mineral Oil 防止
液體揮發(fā)。
3. 按如下 PCR 儀的退火條件:
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 作用 |
1 | 95℃ | 2min | Oligo充分變性 |
2 | 每90s下降1℃,降至25℃ | 約90min | 程序退火 |
3 | 4℃ | 長(zhǎng)期保存 | 暫時(shí)存放 |
4. 退火后可直接用于連接反應(yīng),也可以-20℃凍存?zhèn)溆?。如果退火結(jié)束后打算進(jìn)行酶切等
其它反應(yīng),最好用純化試劑盒進(jìn)行純化,或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過 5%,
以避免 Annealing Buffer 對(duì)后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。
注意事項(xiàng):
1. 避免反復(fù)凍融,以免效率下降。
2. 該試劑只適合于DNA oligo的退火,不適用于RNA oligo的退火。
3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
保存條件:
-20℃,12個(gè)月有效。
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