制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

1、計數(shù)，按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做5-7個細(xì)胞濃度梯度，每組4-6個復(fù)孔。

2、接種后培養(yǎng)2-4小時使細(xì)胞貼壁，然后每100μL培養(yǎng)基加10uL CCK-8（注意不要在孔中生成氣泡，會影響OD值）試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培育1-4小時。用酶標(biāo)儀測定450nm處的吸光度。

計算所需培養(yǎng)液

可以先轉(zhuǎn)染再種板

在10cm盤轉(zhuǎn)染，6h后消化，重懸細(xì)胞，技術(shù)，調(diào)細(xì)胞密度為20000個/ml，種在96孔板，每孔1000μL。

種板時，槍頭吹吸細(xì)胞，重懸，均勻分散。也可以轉(zhuǎn)染和種板同時進(jìn)行，轉(zhuǎn)染6h后換液，每孔100μL新鮮DMEM。

細(xì)胞增殖-毒性檢測

(細(xì)胞活性檢測不進(jìn)行2、3步驟)

1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100uL/孔，每孔細(xì)胞數(shù)至少1000)，將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24小時;

2、向培養(yǎng)板加入不同濃度的待測藥物;

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間；加培養(yǎng)基(完培，基培皆可)，孵育6小時（具體按各自試驗決定），空白孔記得加培養(yǎng)基。

4、向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產(chǎn)生氣泡);(不用更換培養(yǎng)基)直接加

5、將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時; f.用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。