液相色譜儀的各個系統(tǒng)說明
 

關于液相色譜儀有著五大類的系統(tǒng)，相輔相成完成各種功能價值，除此以外還各自有著不同的特點——液相色譜儀的主要系統(tǒng)構成及特點，包括輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數據處理系統(tǒng)等，并且各自有著與眾不同之處：

　　*．輸液系統(tǒng)，

　　液相色譜儀的輸液系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質（即使僅有一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。

　　高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X107Pa，流速可調且穩(wěn)定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

　　第二，就是數據處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對測試數據進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

第三.分離系統(tǒng)，相對來說分離系統(tǒng)由色譜柱、連接管和恒溫器等部分構成，色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內徑為2～5mm，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）．固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點，加之其表面經過機械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。

　　另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應?；|粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數N就越大。這也進一步證明基質粒度小，會提高分辨率的道理。再者，液相色譜儀的恒溫器可使溫度從室溫調到60C，通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。

　　第四．進樣系統(tǒng)，一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。

　　　　第五．檢測系統(tǒng)液相色譜儀常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。

　　1.紫外檢測器主要擁有這樣的特點：使用面廣（如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；靈敏度高（檢測下限為10-10g／ml）；線性范圍寬；對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

　　2.示差折光檢測器目前這一系統(tǒng)通用性強、操作簡單，但靈敏度低（檢測下限為10-7g／ml），流動相的變化會引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。

　　3.熒光檢測器凡具有熒光的物質，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光強度與物質的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物（如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等）的測定，其靈敏度很高（檢測下限為10-12～10-14g／ml），痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。

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