流式細(xì)胞術(shù)是一種基于檢測(cè)設(shè)備-流式細(xì)胞儀，對(duì)懸浮的單個(gè)活細(xì)胞或顆粒進(jìn)行快速、多參數(shù)檢測(cè)分析的一項(xiàng)生物學(xué)前沿技術(shù)。自20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來(lái)后，已在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，免疫相關(guān)的科研實(shí)驗(yàn)室流式檢測(cè)已成為研究手段，而臨床的流式則成為了自基因診斷技術(shù)以來(lái)又一嶄新的高技術(shù)檢測(cè)方法。

那么為了得到一個(gè)真實(shí)可靠、準(zhǔn)確靈敏的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，都有哪些必然的要素呢？我們把這些影響的因素歸納為流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)的三大要素，分別為：流式試劑的搭配、檢測(cè)樣本的制備、流式儀器的應(yīng)用。今天帶大家來(lái)認(rèn)識(shí)下這三位流式界的好朋友

熒光標(biāo)記抗體的搭配

在流式細(xì)胞術(shù)的免疫分型檢測(cè)中，有各種熒光素偶聯(lián)的抗體需要進(jìn)行選擇，特別是對(duì)于多色實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，對(duì)熒光素的選擇搭配有著很高的要求，搭配效果直接影響到檢測(cè)效果，那么我們根據(jù)什么來(lái)進(jìn)行選擇呢？

首要硬性條件-流式細(xì)胞儀的配置，流式細(xì)胞儀的激光器和濾光片配置決定了我們可以選擇的偶聯(lián)熒光標(biāo)記的種類與數(shù)目。

目標(biāo)蛋白條件-染料的亮度與抗原表達(dá)量相適應(yīng)，目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平或豐度決定了熒光素的搭配。低表達(dá)的抗原，推薦搭配高亮度熒光素；高表達(dá)的抗原，推薦搭配低亮度熒光素。

熒光素條件-熒光素之間的光譜重疊最小化，我們需要盡量選擇光譜重疊小的熒光素組合，光譜重疊嚴(yán)重的熒光素同時(shí)檢測(cè)會(huì)導(dǎo)致熒光溢漏，干擾檢測(cè)結(jié)果，需調(diào)節(jié)補(bǔ)償后才能進(jìn)行準(zhǔn)確分析；還可優(yōu)先選擇不同激光激發(fā)的熒光素組合，如FITC搭配APC、PE搭配APC。