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抗體常見問題

來源:南京卡米洛生物工程有限公司   2023年06月07日 11:09  

問題

原因

解決方案

邊緣效應

組織邊緣貼附不牢,邊緣組織松脫漂浮于液體中

APES/多聚賴氨酸處理玻片;組織切片盡量??;盡量避免選用壞死較多的組織


試劑未充分覆蓋組織

滴加試劑時讓試劑完整覆蓋組織

非特異性染色體

抗體質量問題

使用質量有保證的抗體


抗體孵育時間長

減少孵育時間


抗體濃度過高

降低抗體濃度


一抗為多抗

使用單克隆抗體


內源性過氧化物酶及生物素

延長滅活時間


封閉不足

延長封閉時間


DAB孵育時間過久或濃度過高

按說明書配置試劑,鏡下控制反應時間


抗體孵育后洗滌不充分

每次孵育之后洗3*5次


滴加試劑時干片

及時滴加試劑


切片在緩沖液中浸泡過久

抗原修復之后及時封閉加一抗,不能過夜

陰性結果

抗體濃度及質量

選擇有質量保證的抗體,先做預實驗摸索抗體使用濃度


抗原修復不全

摸索合適的抗原修復方式及修復時間


抗原豐度

正常陰性


封閉時間過長

減少封閉時間


DAB孵育時間短

鏡下控制顯色時間


細胞通透不全,抗體未能進入細胞反應

選擇合適的通透劑及其反應時間


一抗二抗不匹配

選擇正確來源的二抗

脫片

玻片未處理好

玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理


切片厚薄不均勻

更換刀片;調整好切片機狀態(tài)


烤片時間或溫度不夠

60攝食度2小時


組織自身問題

腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片


抗原修復時溫度迅速變化

抗原修復后讓其自然冷卻


操作時用力過猛

有脫片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水紙吸干殘余液體

染色弱

抗體濃度低,孵育時間短

提高抗體濃度,延長反應時間


試劑使用超過有效期

試劑定時更新


滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋

滴加試劑前盡量減少殘余液體


封閉過度

減少封閉時間

著色不均勻

切片厚度不一致

更換刀片;調整好切片機狀態(tài)


試劑配制未混勻使局部濃度不一致

試劑充分混勻后滴加


試劑未完整覆蓋組織

滴加試劑時讓試劑完整覆蓋組織


脫蠟不完整

更換脫蠟劑或延長脫蠟時間


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