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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算實(shí)例
數(shù)據(jù)讀取和處理
以?shī)A心法為例
1
推薦使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長(zhǎng)檢測(cè)，測(cè)定450 nm和630 nm波長(zhǎng)下的OD值，并用450 nm的OD測(cè)定值減去630 nm的OD測(cè)定值。
2
ELISA的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品通常要設(shè)置1~2個(gè)復(fù)孔進(jìn)行檢測(cè)，分別求出標(biāo)準(zhǔn)品、樣本吸光度的平均OD值。
3
每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。
4
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，推薦使用Origin或ELISA Calc軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中待檢物質(zhì)的含量可通過(guò)對(duì)應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
結(jié)果計(jì)算
若使用Origin軟件建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，詳細(xì)步驟如下：
第一步: 打開(kāi)軟件，分別在A(X)列和B(Y)列輸入標(biāo)準(zhǔn)品濃度和標(biāo)準(zhǔn)品OD值。
第二步：選擇擬合曲線類(lèi)型
選中上步輸入的數(shù)值，按如下操作依次點(diǎn)擊選項(xiàng)。
第三步：在左側(cè)選擇<Find X/Y>，右側(cè)勾選< Find X from Y>。完成上述操作后，點(diǎn)擊Fit按鍵，擬合曲線和相關(guān)信息將自動(dòng)生成。
第四步：查看標(biāo)準(zhǔn)曲線信息（如參數(shù)值，R-Square等）
第五步：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度
選擇第四個(gè)工作表<Fit NLF Find X from Y1>，在左側(cè)A1（Y）輸入樣本的OD值，對(duì)應(yīng)的濃度將在右列自動(dòng)生成。
注意事項(xiàng)
1. 如果樣本進(jìn)行了稀釋?zhuān)?jì)算樣本濃度時(shí)請(qǐng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
2. 若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。
若使用ELISA Calc軟件建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，詳細(xì)步驟如下：
第一步：將標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)在Excel表格中整理成兩列，第一列是濃度，第二列是平均OD值。
第二步：打開(kāi)ELISA Calc軟件，復(fù)制Excel中數(shù)值部分，點(diǎn)軟件的<粘貼>；選擇<回歸/擬合模型>，一般優(yōu)先選擇Logistic曲線擬合（四參數(shù)）、直線回歸或二次曲線回歸；點(diǎn)擊<回歸/擬合>。
第三步：點(diǎn)<由Y計(jì)算X值>，將樣本OD值在Excel中整理成一列，右鍵選復(fù)制，然后點(diǎn)軟件的<粘貼>，點(diǎn)軟件的<復(fù)制>，即可將計(jì)算的結(jié)果到Excel中粘貼。
注意事項(xiàng)
1. 如果樣本進(jìn)行了稀釋?zhuān)?jì)算樣本濃度時(shí)請(qǐng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
2. 若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。
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